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目的:在建立舌癌Tca8113淋巴道转移裸鼠模型的基础上,建立永生化的舌癌细胞系,证实舌癌转移淋巴结中存在癌干细胞的可能,并进一步检测舌癌转移淋巴结组织中癌干细胞相关标记物的表达情况。方法:采用癌细胞足垫注射法建立淋巴道转移模型,4周后取淋巴结进行原代细胞培养,从中分离、纯化舌癌细胞进行连续传代培养,并进行永生化细胞系的生物学特性鉴定:①倒置相差显微镜下观察活细胞形态、光镜下观察HE染色细胞形态、透射电镜观察细胞内部结构;②细胞核型分析染色体形态;③生长曲线与倍增时间测定分析增殖特性;④致瘤性实验检测成瘤能力;⑤连续传代100代以上。继而采用永生化舌癌细胞系建立舌癌淋巴道转移模型,4周后收集淋巴结,免疫组织化学染色检测癌干细胞相关标记物CD44、BCRP、ESA蛋白的表达情况。结果:在淋巴道转移模型中,HE染色与EMA免疫组化染色发现淋巴结有散在或灶性鳞状上皮癌细胞转移。进而取转移模型裸鼠的淋巴结组织进行原代细胞培养,经分离和纯化以及连续传代而建立舌癌永生化细胞系,命名为Tca8113-M1,目前传代100余代,时间近2年,生长稳定,倍增时间为22.51h,染色体众数58,保持人染色体形态,细胞形态与Tca8113细胞相似。Tca8113-M1在裸鼠体内的成瘤率为100%,裸鼠腋窝皮下成瘤的组织切片显示为典型的鳞状上皮细胞癌。随后,采用建立的Tca8113-M1建立舌癌淋巴道转移模型,4周后,舌癌转移淋巴结组织中检测癌干细胞相关标记物CD44、BCRP、ESA蛋白均呈阳性表达。结论:在舌癌淋巴道转移模型中,可分离培养出永生化的舌癌细胞系,而且癌干细胞相关标记物在淋巴结转移性癌中表达阳性,表明淋巴结转移灶中有癌干细胞存在,提示癌转移的“种子”细胞极可能是癌干细胞。