microRNA-145在肾细胞癌中的表达及其功能研究

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目的:研究 microRNA-145在肾癌组织中的表达水平变化,并探讨 microRNA-145对肾癌细胞ACHN和786-O的增殖、迁移、侵袭、凋亡及周期分布的影响。  方法:收集手术切除并经病理确诊为肾细胞癌的肿瘤标本和相应的癌旁肾组织各45例。在本研究组前期第二代大规模平行测序的基础上,挑选出基因 microRNA-145做深入研究。采用实时荧光定量PCR方法检测microRNA-145在肾细胞癌及癌旁组织中的表达情况。进而采用细胞转染试验对肾癌中microRNA-145的功能及作用机制进行深入探讨。在肾细胞癌ACHN及786-O中转染microRNA-145模拟物,通过MTT比色法、划痕实验、Transwell侵袭实验及流式细胞仪检测凋亡和周期实验阐明 microRNA-145在肾癌细胞中的功能作用。通过计算机数据库软件预测、筛选靶基因,采用荧光素酶报告基因的方法精确验证microRNA-145的靶基因及其作用结合位点。采用RT2人类上皮-间质转化(EMT)PCR阵列检测microRNA-145对84个与EMT过程相关的基因的调控作用。  结果:与相应的对照组比较,microRNA-145在肾癌患者的组织中表达显著降低,平均下调2.3倍,提示该基因可能在肾细胞癌的发生发展的病理过程中发挥着重要的作用;MTT实验结果显示,转染microRNA-145后肾癌细胞的增殖率明显降低;划痕和Transwell细胞侵袭实验结果显示,转染 microRNA-145后肾癌细胞的迁移和侵袭能力降低;流式细胞仪检测凋亡实验结果显示,转染microRNA-145后肾癌细胞的凋亡率显著升高;周期实验结果显示,转染 microRNA-145后肾癌细胞周期 G2期阻滞。软件筛选分析及荧光素酶报告基因验证,致癌基因ANGPT2和NEDD9为microRNA-145的可能直接靶基因。EMT PCR阵列结果显示microRNA-145调控许多EMT相关基因的表达。  结论:实验结果证实,microRNA-145通过抑制其可能直接靶基因ANGPT2和NEDD9的表达从而在肾癌中发挥抑癌的作用,上调 microRNA-145的表达量能够显著抑制肾癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并导致肾癌细胞周期停滞在 G2期,促进肾癌细胞的凋亡。MicroRNA-145可能作为肾癌诊断及治疗中的一个新的潜在靶点。
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