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目的:作为茄科酸浆属植物的主要活性物质,酸浆苦素B具有非常广谱的生物活性,例如:抗炎、免疫调节和抗肿瘤。然而其在非小细胞肺癌中的作用和机制尚未明确阐明。我们前期研究发现,肺部组织可能是酸浆苦素B作用的靶向器官,同时其对A549细胞具有很好细胞毒作用。为了深入探究上述问题,本课题以人的非小细胞肺癌A549细胞作为研究对象,观察酸浆苦素B对该细胞的增殖抑制、周期调控及凋亡诱导等方面的作用,并对相关作用机制进行探究,进而为药物的开发提供新的思路。方法:(1)结合实时无标记细胞分析技术和统计学方法分析酸浆苦素B对A549细胞的增殖抑制作用;(2)运用流式细胞术观察酸浆苦素B对A549细胞周期、凋亡率的干预作用;(3)运用western bolt和real-time PCR技术检测酸浆苦素B作用下p53、p21、CDC2和Cyclin B1蛋白及mRNA表达水平的变化,揭示其影响细胞周期及诱导凋亡的相关机制;(4)运用免疫荧光技术分析酸浆苦素B对胞内线粒体形态的影响;(5)运用海马能量代谢分析系统分析酸浆苦素B对线粒体呼吸链功能影响;(6)运用流式细胞术分析酸浆苦素B作用下,线粒体膜电势和活性氧生成量的变化;(7)运用western bolt技术分析酸浆苦素B作用下,线粒体内凋亡信号通路相关蛋白的表达情况。结果:(1)酸浆苦素B以剂量依赖的方式抑制人非小细胞肺癌A549细胞的增殖;(2)酸浆苦素B能够诱导A549细胞发生G2/M期周期阻滞,进而诱导细胞凋亡,药物以一种不依赖p53介导的机制诱导A549细胞的周期阻滞;(3)酸浆苦素B能够下调呼吸链复合物亚基表达量,造成A549细胞线粒体呼吸功能缺陷;(4)酸浆苦素B能够显著诱导线粒体膜电位电势的下降,促进细胞线粒体内超氧化物的产生;(5)酸浆苦素B上调细胞色素c的表达、活化caspase-9、caspase-3以及PARP蛋白,激活线粒体内凋亡途径最终导致A549细胞发生凋亡;(6)作为caspase广谱抑制剂的Z-VAD-fmk能够显著地抑制酸浆苦素B对A549细胞的凋亡诱导作用。结论:本课题初步证明,酸浆苦素B抑制CDC2/cyclinB1复合物表达,诱导A549细胞发生细胞周期阻滞,进而抑制A549细胞增殖,通过影响线粒体的功能,最终导致A549细胞发生凋亡。