目的 终末期糖尿病综合征包括严重的糖代谢紊乱、广泛微血管病变，通常并发糖尿病肾病、视网膜和神经病变。在目前看来，成功施行胰腺移植不仅提高了受者的生活质量，还防治了与糖尿病相关的严重并发症。移植胰腺为晚期糖尿病治疗的重要选择之一，胰肾联合移植是终末期糖尿病肾病的最佳治疗方法。急性排斥反应是导致移植胰腺丧失功能的最重要原因，胰腺移植后关键是早期诊断及治疗急性排斥反应。临床上通过超声等影像学检查移植胰腺，检测血淀粉酶、脂肪酶、血糖、C肽、免疫抑制剂血药浓度以及膀胱引流患者的尿淀粉酶水平等监测急性排斥反应，这些方法对移植胰腺早期急性排斥反应的诊断特异性差、敏感性约50～75％左右，移植胰腺组织活检仍为鉴别诊断急性排斥反应与其它因素导致移植胰腺丧失功能的最有效方法。本实验研究在建立稳定的小型猪胰腺移植模型的基础上，应用超声引导下经皮穿刺活检移植胰腺组织，动态观察移植胰腺组织病理变化及在移植胰组织内浸润的单核细胞中CD25+表达情况，分析其在诊断移植胰腺早期急性排斥反应中的意义，并通过动态监测术后外周血单个核细胞中CD25+、perforin表达水平及血清IL-2、IL-4水平变化，探讨这些免疫分子表达变化，在监视移植胰腺早期急性排斥反应中的作用和意义，以期为临床胰腺移植早期诊断急性排斥反应提供理论依据，探索较为特异性的诊断早期急性排斥反应的方法。 方法 (1)将40只封闭群小型猪随机配对，施行猪同种异体胰腺移植20次。采用近似临床的移植技术，把供胰的血管与受体髂总血管吻合，静脉转流入体循环，十二指肠节段与受体空肠吻合，胰液肠内引流。术中监测受体平均动脉压、中心静脉压。术后给予常规补液及抗凝、抗感染，仔细观察记录受体表现，并按存活天数计算存活率。 (2)在术后不同时相点，彩色超声多普勒动态检查移植胰腺，同时在超声引导下经皮穿刺活检移植胰腺组织，常规进行组织病理学检查。 (3)观察分析移植胰腺急性排斥反应组织病理学特征，并通过免疫组织化学方法第三军医大学硕士研究生论文检测移植胰腺组织内浸润单核细胞中CD25+表达情况，判断移植胰组织内有无活化淋巴细胞浸润。 (4)此外，采用单克隆抗体一流式细胞仪荧光免疫技术(mAb一队CS)，动态监测外周血单个核细胞中的cD25+淋巴细胞及perforin表达水平，经ELISA法动态测定血清lL一2、IL一4水平变化。 结果 (l)胰腺移植模型建立:在预实验后共完成胰腺移植手术20次，术后有18只受体猪存活超过了1天，手术成功率90%(18/20)。受体的平均动脉压(MAP)在吻合1111.管开放后呈下降趋势，与血流开放前有显著差异(P<0.05)，及时输血及缩短移植物缺血时间均有助于手术成功。移植后受体猪存活情况:共有9只受体猪术后存活)5d以上，其中的8只存活)7d，7只存活)gd，3只存活)12d，2只存活妻15d。移植后1周受体/移植胰腺存活率分别为40%/35%;术后另外有9只受体存活<5〔l。 (2)移植胰腺彩色超声监测及活检组织病理学检查:一般在术后第1一sd移植胰腺血供比较丰富，6一7d后移植胰腺血流信号逐渐减少或稀疏。经皮超声引导下活检时有1例穿刺后出血，超声引导下活检移植胰腺为较简便安全的方法。活检组织病理检查结果:观察术后1一3d移植胰腺有不同程度水肿、小叶间隔内一般无明显细胞浸润，随着时一间延一长，移植胰腺间质内逐渐出现不同程度单核细胞浸润及小血管、胰导管、腺泡损害征象。 (3)移植胰腺内浸润单核细胞中CD25+表达检测结果:术后卜3d检测均为阴J性。在术后4一sd，检测发现移植胰腺内有散在CD25+表达的细胞浸润，5一7d检测结果多呈现明显阳性，既为发现活化淋巴细胞在移植胰腺组织内浸润。 (4)检测外周血单个核细胞中CD25+、perforin表达水平变化:在术后3一sd，eD25+表达开始出现一定程度升高，5一7d时达到峰值;8一gd时开始逐渐下降，但7一gd!l寸perforin表达水平出现明显增高。 (5)血清学检测结果:在术后3d开始，检测血清IL一2浓度逐渐出现明显升高，并在5一12d检测出较高水平，术后ifll.清IL一4水平无明显变化。 结论 (1)小型猪胰腺移植是近似临床胰腺移植良好动物模型。具有实验动物标准化、操作方便、良好重复性和稳定性，以及较低并发症发生率的大动物胰腺移植模型，该模型适用于胰腺移植系列实验研究。歹第三军医大学硕士研究生论文 (2)经皮超声引导下穿刺活检移植胰腺较安全简便，移植胰腺组织的病理学检查分析，结合检测移植胰腺组织内浸润单核细胞中CD25阳性表达，能更有效地早期诊断急性排斥反应。 (3)在移植胰组织中出现CD25阳性的活化淋巴细胞浸润，是急性排斥反应发生的早期事件。外周血CD25十淋巴细胞表达阳性率迅速增高，是提示急性排斥反应发生的有效指标。外周血perforin及血清IL一2水平持续较高水平表达可能提示严重的急性排斥反应。