N6对脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响

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第一部分N6对脊髓损伤后神经细胞凋亡作用的实验研究目的:研究N6(促神经再生因子复合剂)对脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响。方法采用Allen’s法经NYU脊髓损伤撞击器制作大鼠急性SCI模型,实验共分4组:假手术组(A组,只摘除椎板未损伤脊髓),单纯脊髓损伤组(B组),脊髓损伤+生理盐水治疗组(C组),脊髓损伤+N6治疗组(D组)。损伤后72h取材,采用HE染色对脊髓组织进行标记;免疫组化方法检测Caspase3蛋白的表达;逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测凋亡相关基因Caspase3、Fas、Bax、Bcl2、P53mRNA在脊髓组织中的表达变化,Western-Blot检测各组脊髓组织中凋亡相关蛋白Bcl2的表达变化。结果:免疫组化结果显示A组Caspase3阳性表达细胞数很少;B组及C组Caspase3阳性表达细胞数较A组明显增加(P<0.05);D组较B、C阳性表达细胞数明显减少(P<0.05)。RT-PCR检测到Caspase-3、Fas、P53mRNA水平D组较B、C组明显降低(P<0.05);Bcl2/Bax值,D组较B、C组明显升高(P<0.05)。Western-Blot结果示: A组Bcl2大量表达,B、C组明显降低,D组较B、C组明显升高,结果具有统计学意义。结论:N6(促神经再生因子复合剂)能明显抑制脊髓损伤后神经细胞的凋亡。第二部分N6抑制谷氨酸介导培养脊髓神经元凋亡作用的实验研究目的:探讨N6(促神经再生因子复合剂)在谷氨酸介导的脊髓神经元凋亡过程中所起的保护作用。方法:取妊娠13d Wistar大鼠的胎鼠,分离出脊髓神经细胞并进行体外原代神经元的纯化培养,建立谷氨酸对培养细胞的损伤模型,观察加用N6保护后细胞形态的变化,用吖啶橙(AO)、溴化已啶(EB)、Hochest荧光染色法、Tunel法观测凋亡细胞数量的变化,CCK8检测细胞活性的变化;实验分为3组:对照组(C组),谷氨酸损伤组(Glu组),谷氨酸损伤+N6处理组(N6组);每组4个平行皿,实验重复3次。结果:C组凋亡细胞少见;Glu组凋亡细胞明显增加,细胞活性明显降低;N6组凋亡细胞数明显减少,细胞活性明显增加,结果均有统计学意义(P<0.05)。结论:促神经再生因子复合剂N6可明显抑制谷氨酸介导体外培养脊髓神经元的凋亡。
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