食品过敏原压电型免疫传感快速检测技术的研究

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食品过敏原已成为重要的食品安全隐患,河虾与花生在世界粮油组织FAO(1995年)报告中被列为八大常见过敏食品之一。目前过敏原检测方法操作繁琐,无法满足快速、简便、在线检测的要求。本文以抗原抗体免疫反应和压电型传感技术为基础,建立了食品过敏原的压电型免疫传感快速检测方法。本文首先通过硫酸铵分级沉淀和等电点沉淀制备了河虾、花生蛋白,经凝胶色谱及SDS-PAGE分析,确认河虾及花生的主要致敏组分。将河虾、花生蛋白分别免疫BALB/C小鼠,获得河虾抗体效价为30000,半数抑制率IC50为60ug/mL。花生抗体效价为10000,IC50为150ug/mL。免疫传感方法的研制过程中,选择1,6-己二硫醇(HDT)-纳米金作为自组装方式。检测体系的最佳检测条件为:常温下15mM HDT包被90min,纳米金吸附时间为110min,抗体包被情况为4℃条件下包被3小时,其中河虾抗体包被浓度为1:6000,花生抗体包被浓度为1:4000,检测时间为500s。在蛋白浓度为1ug/mL~300ug/mL之间绘制出免疫传感检测的标准曲线,其频率变化趋势与sauerbrey方程一致。其中河虾蛋白的最低检测限为0.03ug/mL,花生蛋白的最低检测限为0.2ug/mL,具有较高的灵敏度。河虾抗体传感器与鱼蛋白交叉率较高,花生抗体传感器与大豆蛋白的交叉率低,实验结果与ELISA结果一致。对河虾和花生蛋白在纯净水中作回收实验,平均回收率在90%~110%之间,重现性实验的平均变异系数小于15%。对免疫传感器进行再生,再生效果较好的是Piranha溶液和强碱强酸溶液,电极可以重复利用13次之多,甘氨酸再生性相对稍弱,但使用比较方便,可以重复再生5次。综合各因素,本论文建立的免疫传感快速检测方法可以运用于食品检测中,具有一定的实际应用价值。
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