新疆发酵驼乳免疫活性肽的分离鉴定及免疫调节机制研究

来源 :新疆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:muyechunqiu
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目的:利用十种乳酸菌和四种酵母菌在实验室将新鲜驼乳混合发酵制备成发酵驼乳,对发酵驼乳进行体外药效学研究,从中分离出具有免疫调节作用的活性肽,观察该活性肽对BALB/C小鼠脾淋巴细胞免疫调节作用的影响并探讨其作用机制。方法:1.将由前期研究中分离得到的十种乳酸菌和四种酵母菌制备成发酵剂,对新鲜驼乳进行混合发酵,测定其在发酵当日和保存二周后的pH值、酸度和活菌数。2.利用离心、超滤、凝胶层析等手段从实验室制备发酵驼乳中提取分离出具有免疫调节作用的组分,体外培养BALB/C小鼠脾淋巴细胞,观察经每个组分(每组均分为低剂量0.25g/L、中剂量0.5g/L、高剂量0.75g/L)干预后,BALB/C小鼠脾淋巴细胞增殖的变化,选取出对脾淋巴细胞增殖刺激作用最强的组分,利用高效液相-质谱联用法(HPLC-MS/MS)对该组分进行检测。3.采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测实验室制备发酵驼乳免疫活性肽对BALB/C小鼠脾淋巴细胞中的NF-κB、IFN-γ、IL-6、IL-12、IL-23、IL-27的mRNA的相对表达量的影响,研究实验室制备发酵驼乳对细胞免疫的调节作用。结果:1.实验室制备发酵驼乳在发酵当天的pH值为4.85±0.00,冷藏14d后pH值降到4.31±0.00;发酵当天的酸度为(71.7±0.03)°T,冷藏14d后酸度升到(85.6±0.02)°T;发酵当天的乳酸菌活菌数为(6.97±0.26)×108mL-1,冷藏14d后升到了(8.63±0.62)×108mL-1,发酵驼乳中乳酸菌的活菌数显著增多(P<0.05)。2.BALB/C小鼠脾淋巴细胞经过从实验室制备发酵驼乳中提取分离出的3个组分干预48h后,组分B的高剂量(0.75g/L)组和组分C的中剂量(0.5g/L)组及高剂量(0.75g/L)组均对脾淋巴细胞刺增殖具有明显的促进作用(P<0.05)。3.组分C的三个肽段序列与糖基化依赖的细胞粘附分子(Glycam-1)、乳清酸性蛋白、α乳清蛋白的部分氨基酸序列吻合。4.经发酵驼乳免疫活性肽干预后的BABL/C小鼠脾淋巴细胞中的NF-κB和IL-6的mRNA相对表达量明显降低(P<0.05),IFN-γ、IL-12、IL-23的mRNA相对表达量明显升高(P<0.05)。结论:实验室制备发酵驼乳可以促进BALB/C小鼠脾淋巴细胞的免疫调节作用,其原因可能与发酵驼乳促进TH1型细胞因子的表达,调节Th1/Th2型细胞因子的平衡有关。
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