NGF对小鼠骨髓诱导的树突状细胞成熟分化及功能的影响

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目的探索神经生长因子(NGF)对小鼠骨髓细胞在体外诱导树突状细胞(DCs)成熟分化及功能的影响。方法第一部分,取C57L/6小鼠股骨、胫骨骨髓细胞,设无外源性细胞因子组(阴性组)、NGF组(20ng/mL、50ng/mL、100ng/m g、150ng/mL)、GM-CSF+IL-4组(阳性组)、GM-CSF+IL-4+NGF组,采用贴壁法及隔天半定量换液法予以不同因子刺激培养小鼠骨髓提取的单个核细胞,第7天采用倒置显微镜观察细胞形态,流式细胞技术分析细胞表型,通过比较各组间CD11c+树突状细胞百分比及绝对值、CDllc+细胞群中CD8a+/CD8a亚型比例、CDllc+细胞群中CD80+CD86+和MHCⅡ+的百分比了解NGF对小鼠骨髓诱导树突状细胞分化及早期成熟的影响。第二部分,用(GM-CSF+IL-4培养未成熟DCs, CDllc免疫磁珠阳性分选提纯得到实验细胞,分PBS组(阴性组)、NGF组、LPS组(阳性组)、LPS+NGF组,24小时后通过流式细胞仪观察各不同处理组DCs的CD80、CD86. MHCⅡ表达情况,ELISA检测经上述不同处理的DCs培养体系上清液中IL-6、IL-10、IL-12的分泌水平。结果各NGF浓度梯度中,50ng/mL浓度使小鼠骨髓细胞向CDllc+树突状细胞分化的百分比最高,NGF组CD11c+树突状细胞百分比及绝对值高于阴性组,低于阳性组,阳性组与NGF+GM-CSF+IL-4组无明显差别,且在各组中均以CD8a-DCs为主;以CDllc+树突状细胞为分析群,CD80、MHCⅡ和CD86的表达百分比在NGF组与阴性组之间,阳性对照组和NGF+GM-CSF+IL-4组之间差异均无统计学意义;以所有细胞为分析群,NGF组CD80和MHCⅡ表达百分比高于阴性组,低于阳性组,阳性组与NGF+GM-CSF+IL-4组间无明显差别。在未成熟DCs向成熟DCs发育阶段,与LPS组比较,NGF可以上调LPS诱导DCs表面CD80、CD86、MHCⅡ表达强度,及IL-12、IL-10、IL-6的分泌,单独NGF刺激对其无影响。结论NGF可以诱导骨髓单个核细胞向CD11c+Cs的定向分化,并且以CD8a-DCs为主,能进一步上调LPS诱导的DCs的晚期成熟及分泌细胞因子。
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