目的:将以外源性HSP70为目的基因的重组真核表达质粒pIRES2-EGFP-HSP70转染入人肺癌A549细胞,观察其在A549细胞中的表达及对A549细胞生长的影响,以期为进一步研究HSP70作用于肺癌的分子机制提供实验依据。　　 方法:(1)采用碱裂解法从重组真核表达质粒pIRES2-EGFP-HSP70和空载体粒pIRES2-EGFP中抽提质粒DNA;(2)使用含10％胎牛血清的LG-DMEM培养基,于37℃、5％CO2饱和湿度环境下培养A549细胞;(3)应用阳离子脂质体转染法将上述质粒分别转染入A549细胞;(4)实验分组:未转染细胞对照组(NC)、转染试剂对照组(TC)、空载体对照组(EC)、实验组(HSP70)。(5)荧光显微镜观察转染后绿色荧光蛋白(GFP)报告基因表达情况,并应用流式细胞术(FCM)检测转染后36h的转染效率;(6)对HSP70mRNA的表达水平进行实时荧光定量PCR(real-timePCR)检测:(7)MTT法检测外源HSP70基因对转染细胞增殖的影响;(8)FCM检测外源HSP70基因对A549细胞周期变化的影响。　　 结果:(1)转染后12h、24h、36h、48h均可在荧光显微镜下观察到GFP表达阳性细胞,其中转染后36h阳性细胞数目最多表达最强,转染效率为38.57％;(2)实验组各时间段HSP70mRNA表达水平均较对照组明显增高,提示外源性HSP70基因能在A549细胞中高效表达;(3)实验组能显著抑制A549细胞的增殖(P＜0.01),且转染后48h抑制率最高;(4)与对照组相比,转染后36h实验组细胞G0/G1期比例明显增多,而S期比例降低。　　 结论:成功将重组真核表达质粒pIRES2-EGFP-HSP70转染入人肺癌A549细胞后,外源性HSP70基因能够在A549细胞中有效表达;高表达的HSP70可显著抑制A549细胞的增殖,并引起细胞周期阻滞于G0/G1期。