USMM联用技术在丹参活性成分提取分离中的集成应用

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丹参始载于《神农本草经》,列为上品,以后历代本草均有收载。《中华人民共和国药典》(2010年版,一部)收载的丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根和根茎。丹参性苦、微寒,归心、肝经;具有活血祛瘀、痛经止痛、清心除烦、凉血消痈的功效。现代药理研究表明丹参的药理作用主要是对心血管系统,能扩张血管,加快血流,改善微循环,改变血液粘滞性,增加心肌供血量、供氧量、降低心肌耗氧量等,用于治疗心绞痛、心肌梗塞等心血管系统疾病。此外,丹参还具抗肿瘤、抗菌、抗炎等作用。丹参提取的活性成分包括脂溶性成分和水溶性成分。根据多年来的文献报道,脂溶性活性成分为结晶性菲醌类化合物,主要包括丹参酮ⅡA、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮B、二氢丹参酮参等;水溶性活性成分为邻苯二羟基化合物,主要包括丹酚酸β、丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸等。2010年版中国药典一部规定丹参药材分别以丹参酮ⅡA与丹酚酸B为含量测定指标。USMM联用技术,是将超声波提取(Ultrasonic extraction)、超临界流体萃取(Supercritical fluid extraction)、大孔树脂分离技术(Macroporous resins separation technology)、膜分离技术(Membrance separation technology)等提取、分离技术联合应用。本论文在文献研究的基础上,采用USMM联用技术,对丹参药材脂溶性活性成分和水溶性活性成分提取、分离工艺进行研究。目的在于提高丹参活性成分的提取率和产品纯度,提高丹参提取物质量,为新型丹参制剂研究提供依据。主要内容包括以下几个方面:1、超临界C02萃取丹参脂溶性活性成分工艺研究研究了萃取压力、萃取温度、萃取时间、夹带剂用量等因素对萃取率的影响,通过正交试验,以丹参酮ⅡA、隐丹参酮提取率为考察指标,得到优化的超临界CO2萃取工艺:丹参药材粉碎过20目筛,萃取压力25MPa,萃取温度40℃,萃取时间2小时,以与药材等量的95%乙醇作夹带剂。在该条件下,丹参酮ⅡA的提取率为87.6%,隐丹参酮提取率为88.7%,总丹参酮的提取率为88.5%,萃取物得率为2.1%。2、超声强化超临界CO2萃取丹参脂溶性活性成分工艺研究在超临界CO2萃取(以下简称SFE)丹参正交试验优选工艺基础上,筛选超声强化超临界CO2萃取(以下简称USFE)丹参工艺的各种因素水平,以丹参酮ⅡA、隐丹参酮的提取率为考察指标,确定丹参较佳USFE-C02萃取工艺为:丹参药材粉碎过20目筛,萃取压力18MPa,萃取温度40℃,萃取时间1.5小时,以与药材等量的95%乙醇作夹带剂,超声波功率500W,超声频率40KHz。在该条件下,丹参酮ⅡA的提取率为88.1%,隐丹参酮提取率为89.8%,总丹参酮的提取率为88.8%,萃取物得率为2.7%。3、超声波提取丹参USFE药渣水溶性活性成分工艺研究根据文献报道,考察了加水量、提取次数、提取时间等因素对丹参USFE药渣提取率的影响,以丹酚酸B提取率为考察指标,得到优化的超声波提取工艺:加水20倍量,超声提取2次,每次提取20分钟,提取温度80℃。在该条件下,丹酚酸B的提取率为88.9%,总丹酚酸的提取率为89.7%,提取物干膏率为38.7%。4、大孔树脂技术纯化丹参水溶性活性成分工艺研究研究了D101大孔吸附树脂用量、洗脱解吸乙醇浓度、乙醇用量等主要影响因素对丹参水溶性活性成分纯化工艺的影响,以丹酚酸B转移率为考察指标,得到大孔树脂纯化丹参水溶性活性成分的优选工艺:D101大孔吸附树脂用量为生药量5倍,洗脱解吸乙醇浓度为70%,乙醇用量为12倍柱体积。在该条件下,丹酚酸B的转移率为84.6%,总丹酚酸的提取率为83.8%,提取物干膏率为14.2%,比上D101大孔吸附树脂前降低了24.5%。5、膜分离技术纯化丹参水溶性活性成分工艺研究研究了膜规格、药液浓度、操作压力等因素对对丹参水溶性活性成分膜分离纯化工艺的影响,以丹酚酸B转移率为考察指标,得到膜分离技术纯化丹参水溶性活性成分的优选工艺:用10000 Da规格的超滤膜,药液浓度0.1g/ml,操作压力0.2-0.3MPa。在该条件下,丹酚酸B的转移率为86.2%,总丹酚酸的提取率为85.4%,提取物干膏率为33.9%,比上D101大孔吸附树脂前降低了4.8%。6、大孔树脂-膜分离技术联用纯化丹参水溶性活性成分工艺研究丹参USFE渣超声水提液先经膜分离、再上大孔树脂,二者联用工艺纯化后,丹酚酸B的转移率为83.91%,总丹酚酸的转移率为83.14%,干膏率为13.60%;丹参USFE渣超声水提液先上大孔树脂、再膜分离,二者联用工艺纯化后,丹酚酸B的转移率为84.10%,总丹酚酸的转移率为83.59%,干膏率为13.82%。
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