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目的探讨羟基喜树碱(Hydroxycamptothecin,HCPT)对人肺癌A549细胞自噬的诱导作用及具体机制。方法1、观察不同浓度HCPT对人肺癌A549细胞存活率及自噬相关蛋白表达的影响。实验分组:(1)对照组:A549细胞全程常规培养;(2)50μM HCPT组;(3)200μM HCPT组;(4)400μM HCPT组(A549细胞用含有不同浓度(50μM、200μM、400μM)HCPT的培养基培养24h)。用CCK-8法检测各组A549细胞存活率。用Western blot法检测不同浓度HCPT对各组细胞自噬相关蛋白(P62、LC3、Beclin-1、BCL-2、PHB2)表达的作用,确定后续实验HCPT浓度。2、观察自噬抑制剂3-MA对HCPT诱导自噬作用的影响。实验分组:(1)对照组:A549细胞全程常规培养;(2)HCPT组:A549细胞用含有HCPT(200μM)的培养基培养24h;(3)抑制剂(3-MA)+HCPT组:A549细胞先加入自噬抑制剂3-MA(5m M)预处理1h,再用含有HCPT(200μM)的培养基培养24h。(4)抑制剂组:A549细胞加入自噬抑制剂3-MA(5m M)预处理1h后常规培养24h。用Western blot法检测各组细胞P62、LC3、Beclin-1、BCL-2、PHB2等蛋白的表达。结果1、CCK8法检测结果显示,与对照组相比,不同浓度HCPT(50μM、200μM、400μM)组细胞存活率均下降,且具有剂量依赖性,差异有统计学意义(F=76.745,P<0.001)。2、Western blot检测自噬相关蛋白结果显示,不同浓度HCPT(50μM、200μM、400μM)组p62蛋白表达水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);不同浓度HCPT(50μM、200μM、400μM)组LC3Ⅱ/Ⅱ比值均高于对照组,且200μM组最为显著,差异有统计学意义(P<0.05);200μM和400μM HCPT组BCL-2蛋白表达水平较对照组明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);不同浓度HCPT(50μM、200μM、400μM)组Beclin-1蛋白的表达均较对照组显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);不同浓度HCPT(50μM、200μM、400μM)组PHB2蛋白表达均高于对照组,且200μM组最为显著,差异有统计学意义(P<0.05)。3、HCPT(200μM)降低p62、BCL-2及增高LC3Ⅱ/Ⅱ、Beclin-1、PHB2的作用,均能够被选择性自噬抑制剂3-MA所抑制,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论HCTP能够通过激活BCL-2/Beclin-1信号通路以及提高PHB2表达,促进细胞自噬,降低A549细胞存活率,发挥抗肿瘤作用。图7幅;表1个;参100篇