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目的：1.在mRNA水平和蛋白水平上检测非小细胞肺癌常规分割放疗抵抗细胞系和大分割放疗抵抗细胞系DNA损伤修复能力的变化。2.检测放疗抵抗细胞的细胞周期分布、凋亡水平的变化情况及分析放疗抵抗产生的机制。方法：1.体外培养A549, A549-2GyR, A549-4GyR细胞,给予三种细胞不同剂量射线照射,克隆形成实验检测细胞增值能力。2.根据全基因组表达谱芯片结果,分析筛选出与DNA损伤修复相关且有表达量差异的蛋白。体外培养A549, A549-2GyR, A549-4GyR细胞,通过RT-PCR获取目的蛋白DNA模板,运用Real-time PCR精确定量分析抵抗细胞中修复相关蛋白在mRNA水平上的差异。3. Western Blot检测抵抗细胞中基础状态下Ku70、Ku80、DNA-PKcs、LIG4、 Rad50、XRCC4、Mrel1等修复相关蛋白和p53、p21、CylinD1等周期相关蛋白的表达水平。4.流式细胞术检测抵抗细胞的细胞周期分布(PI单染)和凋亡水平(Annexin V/PI双染)。结果：1.放疗后,A549, A549-2GyR, A549-4GyR细胞增值能力依次增强。2.通过对全基因组芯片结果进行分析筛选,选择KKu70、Ku80、DNA-PKcs、LIG4、 Rad50、XRCC4作为目的分子,Real-time PCR发现XRCC4、Ku80、DNA-PKcs和Rad50的mRNA表达水平在A549,A549-2GyR和A549-4GyR依次递减,而Ku70和LIG4也是在A549-4GyR细胞中表达量最低。3. Western Blot检测到修复相关蛋白DNA-PKcs、XRCC4、LIG4、Ku80、Ku70、 Rad50、Mrel1、NBN、XLF的蛋白表达在A549, A549-2GyR和A549-4GyR中依次递减；细胞周期相关蛋白p53、Phospho-p53(Ser20)、Phospho-p53(Ser37)、Cyclin D1、CDK2表达量也依次递减,而p21表达量则逐渐增多。4.流式细胞术检测到基础状态下A549细胞周期分布,G1期62.63%,G2期10.04%,S期27.33%; A549-2GyR为G1期64.45%,G2期11.77%,S期23.79%；A549-4GyR为G1期72.37%,G2期8.7%,S期18.93%。凋亡水平分析,A549凋亡率0.7%, A549-2GyR凋亡率1.7%, A549-4GyR凋亡率0.3%。结论：1.通过多次放疗筛选,可获得放疗抵抗细胞。2.与对照组细胞A549和常规分割抵抗细胞A549-2GyR相比,大分割抵抗细胞A549-4GyR细胞中DNA损伤修复相关蛋白存在表达量上的差异。实验结果证实损伤修复分子Ku70、Ku80、DNA-PKcs、LIG4、Rad50、XRCC4在mRNA转录水平上存在差异,在大分割放疗抵抗细胞中表达量最低。3.在蛋白翻译水平上,大分割抵抗细胞与对照组和常规分割抵抗细胞相比,蛋白表达量也降低,与mRNA水平检测结果基本一致。4.基础状态下,A549、A549-2GyR和A549-4GyR在凋亡水平上无明显差异。5.流式结果发现大分割抵抗细胞较对照组和常规分割抵抗细胞有更多的细胞阻滞在G1/S期,并且与蛋白表达检测结果相一致,而DNA损伤修复蛋白的表达水平却降低,因此,细胞周期发生阻滞,细胞有更充分的时间应对放射造成的DNA损伤可能是抵抗产生的主要原因。