美国山核桃组织培养技术的研究

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本文选用美国山核桃实验室实生苗和成年树的叶片、带芽茎段为实验材料,对叶片和茎段组织培养从外植体的选择、最佳培养基的筛选、最佳植物生长调节剂及其配比以及其他一些影响植物组织培养的因素做了较系统地研究。主要结果如下:1美国山核桃叶片组织培养中,选用一年生实生苗叶片和DKW培养基愈伤组织诱导率较高。使用75%的酒精快速消毒10s后,再用0.1%HgCl2浸泡4min可降低污染率,并且每瓶培养基接种1-2块外植体可以有效减少污染率。2美国山核桃叶片组织培养中,在培养基中添加NAA0.15mg/L+2,4-D0.5mg/L+6-BA1.5mg/L,美国山核桃叶片组织培养褐化率降低,在培养基中添加NAAO.1mg/L+2,4-D1.5mg/L+6-BA2.0mg/L可使美国山核桃愈伤组织诱导率较高,培养基的其他添加成分为:蔗糖30g/L,琼脂10g/L,调节pH=5.8。3在进行美国山核桃叶片组织培养时,为抑制外植体褐变反应,可将经过常规消毒的外植体接种到只含有蔗糖和琼脂的培养基中培养2d左右再将其转移到DKW+NAAO.10mg/L+2,4-D1.5mg/L+6-BA2.0mg/L中继续培养可以有效的降低外植体的褐化率。4在培养基中分别添加1.0g/L的AC、1.5mg/L的Na2S2O3、0.02mg/LPVP的都可以有效的降低外植体的褐化率,同时不影响愈伤组织的诱导。其中,添加Na2S2O3外植体褐化率最低,添加PVP诱导率较高。添加GA3会抑制美国山核桃叶片组织培养实验中愈伤组织的诱导。5在接种前使用400mg/L的PVP或200mg/L的Na2S2O3浸泡试材可以有效降低美国山核桃叶片组织培养降低试材褐化率。对接种后的培养基先进行完全遮光处理培养一周后再进行光培养,对抑制外植体的褐化反应起了积极的作用,可以有效地降低试材的褐化率。6适宜美国山核桃叶片愈伤组织增殖的最佳培养和激素组合为:DKW+6-B A0.5mg/L+NAA0.1mg/L,蔗糖30g/L,琼脂10g/L,pH=5.8。7在美国山核桃茎段组织培养实验中,一般选用幼龄茎段进行实验,筛选出适合茎段愈伤组织诱导的培养基和激素配比为WPM+NAA1.Omg/L+6-BA3.0mg/L,添加30g/L蔗糖,10g/L琼脂,调节pH=5.8。8降低美国山核桃茎段组织培养中外植体褐化的方法有:①培养基中添加1.0mg/L的活性炭;②使用400mg/L的PVP或300mg/L的Na2S2O3预处理试材;③培养基中添加90mg/L的PVP或加7mg/L的Na2S203。
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