Cd污染下两种生态型东南景天内生细菌多样性的比较

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超累积生态型和非超累积生态型东南景天(Sedum alfredii)在吸收和积累重金属方面存在明显差异,然而,目前对两种生态型东南景天内生细菌群落结构的差异尚不清楚。因此,本论文首先采用培养方法比较了生长在自然条件下超累积生态型与非超累积生态型东南景天根际土壤、根系、茎和叶片种可培养内生细菌的数量,分离和纯化代表性内生细菌,并测定菌株对锌、镉抗性水平、分泌吲哚乙酸、高铁载体和溶解无机磷的特征。进一步通过盆栽实验,研究在不同Cd污染土壤上超累积生态型和非超累积生态型东南景天叶、茎和根内生细菌多样性差异,利用RDA(冗余分析)分析土壤理化性质、植物生长特征、植物重金属Cd含量对内生菌多样性的影响,以期从土壤-植物-内生菌的相互关系的角度来阐释超累积东南景天对镉吸收、解毒及积累的生态机制。本论文取得的主要研究结果如下:(1)生长在浙江衢州铅锌矿的超累积生态型东南景天和浙江杭州九溪茶园的非超累积生态型东景天叶、茎、根、根际土中存在大量可培养细菌,其中超累积生态型东南景天叶和根内生菌数量高于非超累积特性东南景天,但茎的数量则相反。从超累积生态型东南景天叶、茎、根组织中分离纯化得到30株内生菌,从非超累积生态型景天叶、茎、根组织中分离纯化得到32株内生菌。在超累积生态型东南景天和非超累积生态型东南景天内生菌中,Zn抗性水平大于5 mmol·L-1、Cd抗性水平大于0.5mmol·L-1、IAA(吲哚乙酸)浓度大于15 mg·L-1、铁载体活性单位小于20、溶磷圈直径大于2 mm的比例分别为43.33%和12.50%、36.67%和18.75%、25.00%和50.00%、87.50%和16.67%、71.43%和100%。(2)随着土壤Cd浓度的增加,超累积生态型东南景天叶的可培养内生菌数量减少,茎内生菌数量增加,根内生菌数量先增加后减少,非超累积生态型东南景天叶、茎、根内生菌均减少。(3)生长在不同土壤Cd浓度土壤上的两种生态型东南景天的叶、茎和根内生细菌的丰富。在Phylum水平,两种生态型东南景天的根、茎和叶组织种的优势菌群均为变形菌门(Proteobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)、放线菌门(Actinobacteria)和拟杆菌门(Bacteroidetes)等。在属水平,超累积生态型东南景天的优势菌群为链球菌属(Streptococcus),鞘脂单胞菌属(Sphingomonas),奈瑟氏菌属(Neisseria),新鞘氨醇杆菌属(Novosphingobium)和罗思氏菌属(Rothia)等,非超累积生态型东南景天的优势菌群为拟杆菌属(Bacteroides),鞘脂单胞菌属(Sphingomonas),甲基杆菌属(Methylobacterium),梭状芽孢杆菌属(Clostridium),芽孢杆菌属(Bacillus)和红球菌属(Rhodococcus)等。在对照土壤上,优势菌群为链球菌属(Streptococcus),奈瑟氏菌属(Neisseria),罗思氏菌属(Rothia),新鞘氨醇杆菌属(Novosphingobium)和双歧杆菌属(Bifidobacterium)等;当土壤镉浓度增加时,优势菌群为鞘脂单胞菌属(Sphingomonas),鞘氨醇杆菌属(Sphingobacterium),肠球菌属(Enterococcus),甲基杆菌属(Methylobacterium),慢生根瘤菌属(Bradyrhizobium),普氏菌(Prevotella),链霉菌属(Streptomyces)和罗尔斯通菌属(Ralstonia)等。(4)RDA分析发现,超累积生态型东南景天叶片组织中的鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas)丰度主要受叶Cd含量的影响;茎组织中鞘氨醇杆菌属(Sphingobacterium)、假单胞菌属(Pseudomonas)、肠杆菌属(Enterococcus)的丰度主要受茎Cd含量的影响;在超累积生态型东南景天叶片组织中韦永氏球菌属(Veillonella)、克雷伯氏菌属(Klebsiella)和拟杆菌属(Bacteroides)的丰度与植株高度、叶片鲜重正相关;在超累积生态型东南景天根组织中,叶杆菌属(Phyllobacterium)、甲基杆菌属(Methylobacterium)、慢生根瘤菌属(Bradyrhizobium)的相对丰度与土壤有效Cd含量、根Cd含量正相关,梭状芽胞杆菌属(Clostridium)和根瘤菌属(Rhizobium)相对丰度与土壤pH正相关。
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