论文部分内容阅读
研究目的：总体研究目的是①建立血浆内皮来源微泡(直径在0.5—1.0微米的内皮微泡、直径<0.5微米的小内皮微泡)的分离、制备、检测和免疫表型检测方法,②在临床心血管疾病患者外周血中不同免疫表型的内皮细胞来源的微泡数量水平和特征,③采用多种统计学分析方法对检测结果及患者临床信息进行显著性分析、单因素和多因素关联性分析等,探讨内皮微泡对心血管疾病的生物学标记意义和内皮细胞损伤在心血管疾病中的病理生理学意义。第一部分研究研究目的：通过研究轻度、中度、重度高血压和药物控制达标的高血压患者,及健康人外周血中不同标记的内皮微泡数量和百分率含量,分析其免疫表型、关联因素和诊断阈值,探讨其病理生理学作用和内皮微泡作为临床诊断和监测高血压患者内皮功能生物学标记物的意义。第二部分研究研究目的：通过比较高血压伴冠心病时和不伴冠心病时外周血中内皮微泡数目和百分率含量,分析其免疫表型、关联因素和诊断阈值,找出在高血压时能进一步损伤内皮功能与导致冠心病发生相关的特定免疫表型内皮微泡。第三部分研究研究目的：通过检测高血压和健康人外周血中的内皮来源的小微泡的数目和百分率含量,找出表达特异免疫表型的相关小内皮微泡,探讨其在高血压患者中对内皮功能监测的潜在价值。研究方法：总体研究方法主要采用流式细胞术技术和多种统计学分析方法。第一部分和第二部分：从高血压患者、高血压伴冠心病患者及健康人每个实验者外周血中抽取3毫升外周血,在1小时内离心获得贫瘠血小板血浆,然后-80℃冻存待检,检测时,将血浆标本恢复致室温,加特异性单克隆抗体抗体,用0.8um的微珠来确定微泡的大小,用流式细胞术检测微泡数目及百分率。内皮微泡免疫表型范围为CD31+/CD42b-、CD62E+、CD51+、CD144+,为观察血小板来源的微泡与内皮微泡的相互关系,本文检测内皮微泡同时对血小板微泡进行了同步研究,血小板微泡免疫表型范围为CD31+/CD42b+、CD62P+。并通过ROC曲线分析相应的诊断指标的诊断价值,利用Spearman回归和线性回归分析进行微泡之间及微泡和各临床参数之间的相关性比较,通过统计学进行内皮微泡和血小板微泡数及百分率的比较。第三部分：从高血压患者和健康人每个实验者中抽取3毫升外周血,在1小时内离心获得贫瘠血小板血浆,然后放在-80℃冻存待检。检测时将标本恢复至室温,加特异性单克隆抗体抗体,通过调节流式细胞仪的阈值(阈值为35000)以及用0.46um的微珠来确定相应内皮来源的小微泡的大小,CD31+/CD42b和CD62E+内皮细胞来源的小微泡数目和百分率,通过统计学进行实验组和对照组间内皮来源的小微泡的数目及百分率含量的比较。研究结果：第一部分：CD31+/CD42b内皮微泡数目在轻中度,重度高血压和控制达标的高血压患者中显著高于健康者(各组p<0.01).在不同程度的高血压之间无显著的差异。发现CD51+内皮微泡和CD42b+血小板微泡的数目只在控制达标的高血压组中显著低于健康者(p<0.05).CD62E+内皮微泡的数目在中度高血压患者组和控制达标的高血压患者组中显著高于健康者(p<0.05)。其它免疫表型的内皮微泡数目在各组间不存在统计学差异。高血压各组的CD31+/CD42b-、CD144+、CD62E+内皮微泡的百分率显著高于健康组,尤其是高血压控制达标组CD62E+内皮微泡的百分率显著高于中度和重度高血压组。在各组间其它免疫表型的微泡其百分率含量无显著的统计学差异。第二部分：在高血压伴冠心病组和高血压不伴冠心病组中,CD31+/CD42b内皮微泡数目显著高于健康对照组(p<0.01)。在高血压伴冠心病组CD62E+内皮微泡数目显著高于健康对照组(p=0.014).在高血压半冠心病组以及不伴冠心病组中,CD31+/CD42b-、CD144+以及CD62E+内皮微泡的百分率含量显著高于健康对照组(p<0.01)。第三部分：高血压患者中CD62E+小内皮微泡的百分率含量显著高于健康者对照组(p<0.01),CD62E+小内皮微泡的百分率含量的ROC曲线面积为0.865,最佳诊断阈值为1.15.研究结论：表型为CD31+/CD42b-、CD144+、CD62E+的内皮细胞来源微泡在高血压疾病中具有重要的潜在价值,是通过监测内皮功能来反映疾病的崭新指标,是进一步研究高血压等慢病的新的切入点。表型为CD62E+的内皮细胞来源小微泡对高血压疾病和冠心病具有预后判断的价值。表型为CD31+/CD42b+、CD62P+的血小板来源微泡是研究内皮微泡重要补充,与不同表型的内皮微泡具有协同监测、协同预后判断和协同病理生理功能。本实验的不足之处1.样本的数量不够大,需要更大的样本量来支持本研究的结果。2.由于条件所限,本研究患者和健康人年龄匹配的样品尚不足,虽然本实验采用了多元回归后排除年龄对微粒检测的影响,但将来仍需要在年龄匹配的情况下,进一步验证本实验的结果。3.本实验仍需要进行药物对微粒的影响的研究。4.下一步需要进行微粒如何导致内皮功能损害的机制性研究。下一步拟进行的研究工作：研究不同表型的内皮细胞来源微泡的产生机制,以及血液循环中的内皮微泡进一步引起内皮功能损伤及其导致高血压发生和发展的病理生理学机制。