利用双同源重组系统解决异位谱系示踪问题

来源 :中国科学院大学 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学研究院 上海生物化学与细胞 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhouwenwumo
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基于Cre-loxP同源重组系统的体内遗传示踪技术是目前应用最广泛的在体追踪干细胞等命运的技术,该遗传示踪系统的精确性主要取决于Cre表达在靶向细胞中的特异性,然而,Cre可能会在非靶向细胞中表达即所谓“异位”表达,这是许多干细胞谱系研究领域引起争议的主要原因。我们建立了一种新的遗传谱系示踪系统,该系统将Dre-rox同源重组系统引入到传统的基于Cre-loxP同源重组系统的遗传谱系示踪技术中,利用Dre-rox同源重组系统来加强Cre-loxP系统示踪的准确性。Dre-rox同源重组可以严格控制潜在的“异位”Cre-loxP重组,有效地规避了谱系示踪中的Cre特异性的不确定性。利用这种新系统(命名为VERITY),我们首先解决了成体心脏c_Kit+心脏干细胞的问题,c-Kit+干细胞问题之所以存在争议主要是由于c-Kit本身微量的表达在心肌细胞中,我们利用VERITY系统成功的实现了非心肌细胞中c_Kit+干细胞特异性的遗传谱系示踪,结果发现,c_Kit+干细胞在成体心脏生理稳态和损伤修复过程中均不会分化形成心肌细胞。此外,利用VERITY系统我们还解决了肝脏领域有关Sox9+肝组细胞能否转分化形成肝细胞的争议问题,造成该争议的主要原因是Sox9除了表达在胆管上皮细胞中还少量的表达在了胆管周围的肝细胞里面,我们利用VERITY技术成功的实现了Sox9+胆管上皮细胞中Sox9+细胞特异性的遗传谱系示踪,结果发现在肝脏生理稳态和损伤修复过程中Sox9+胆管上皮细胞并不会转分化形成肝细胞。通过克服“异位”谱系示踪的技术障碍,VERITY技术提供了更为准确地分析干细胞谱系和命运决定的方法,有助于体内研究干细胞在疾病和再生中的命运可塑性。
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