EHEC O157国内分离株Stx2基因的克隆及序列分析

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该实验依照文献报道的Stx2序列设计了引物,采用聚合酶链式反应(PCR),分别从EHEC国内分离株94H、042、094的基因组DNA中扩增出Stx2基因,并将目的片段回收和提纯,在连接酶的作用下重组入pMD18-T载体上,将连接产物转化入用氯化钙法制备的感受态大肠杆菌DH5α中,转化菌在含有X-ga1、IPTG和氨苄青霉素的LB固体培养基上,37℃培养12~16h,挑选白色菌落培养,采用碱裂法提取质粒,经PCR鉴定,证明已成功构建了重组质粒(pStx2-94H,pStx2-042,pStx2-094,并对该目的基因分别进行测序,经计算机软件DNASIS分析三个序列,与Stx2,Stx2c,Stx2d序列比较.
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