【摘 要】
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[目的]本研究旨在探讨CXCR2是否在不同部位脂肪组织（adipose tissue,AT）诱导的肝细胞葡萄糖代谢中发挥作用。[方法]首先,采用CXCR2特异性小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）和CXCR2过表达质粒转染HepG2细胞构建沉默、过表达CXCR2的HepG2细胞;其次将稳定释放脂肪因子的内脏脂肪组织（visceral adipose tissue,
【基金项目】
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国家自然科学基金,81660141,不同部位脂肪组织对肝细胞葡萄糖代谢及胰岛素信号传导的影响及机制研究； 昆明医科大学2020年研究生创新基金,2020S123, CXCR2对不同部位脂肪组织诱导的肝细胞糖原合成的影响及机制；
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[目的]本研究旨在探讨CXCR2是否在不同部位脂肪组织（adipose tissue,AT）诱导的肝细胞葡萄糖代谢中发挥作用。[方法]首先,采用CXCR2特异性小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）和CXCR2过表达质粒转染HepG2细胞构建沉默、过表达CXCR2的HepG2细胞;其次将稳定释放脂肪因子的内脏脂肪组织（visceral adipose tissue,VAT）和皮下脂肪组织（subcutaneous adipose tissue,SAT）通过 transwell 小室与干预CXCR2表达后的HepG2细胞进行共培养;再次,收集共培养后各组HepG2细胞,利用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR）方法检测共培养后HepG2细胞的CXCR2表达情况,验证不同部位AT诱导下HepG2细胞CXCR2表达的干预效果,同时收集共培养后各组上清液,利用乳酸脱氢酶（（lactate dehydrogenase,LDH））细胞毒法检测共培养后上清液LDH活性,倒置显微镜观察HepG2的生长情况,以期了解共培养后HepG2细胞的凋亡情况,并进一步利用活细胞开展后续实验;最后,收集基础状态下和胰岛素刺激状态下共培养后各组HepG2细胞,经荧光葡萄糖类似物2-NBDG染色,用流式细胞仪观察荧光标记的HepG2细胞比例,评估HepG2细胞的葡萄糖摄取率,同时采用过碘酸希夫式（periodic acid-shiff stain,PAS）染色法观察HepG2细胞内糖原分布情况,蒽酮法测定HepG2细胞内糖原含量。[结果]（一）不同部位AT诱导下HepG2细胞CXCR2表达的干预效果验证:与AT作用下的HepG2细胞相比,AT诱导下转染CXCR2-siRNA的HepG2细胞,其CXCR2表达水平明显降低（P<0.001）,而AT诱导下转染CXCR2-过表达质粒的HepG2细胞,其CXCR2表达水平明显升高（P<0.001）。（二）不同部位AT诱导下HepG2细胞上清液LDH活性测定结果及细胞生长情况:1)与HepG2组相比,不同部位AT诱导下HepG2细胞上清液的LDH水平均升高（P<0.05）;2)倒置显微镜下HepG2细胞形态良好,折光性良好,细胞计数结果显示各组HepG2细胞仍保持一定活性。（三）CXCR2对不同部位AT诱导下的HepG2细胞葡萄糖摄取率的影响:1)在基础状态下或胰岛素刺激下,与AT诱导下的HepG2细胞相比,AT诱导下转染CXCR2-siRNA的HepG2细胞,其葡萄糖摄取率升高（P<0.001）;2)在基础状态下或胰岛素刺激下,与AT诱导下的HepG2细胞相比,AT诱导下转染CXCR2-过表达质粒的HepG2细胞,其葡萄糖摄取率降低（P<0.001）;3)以HepG2组为基线,AT诱导下转染CXCR2-过表达质粒的HepG2细胞的葡萄糖摄取率下降程度最大,AT诱导下的HepG2细胞的次之,AT诱导下转染CXCR2-siRNA的HepG2细胞的葡糖糖摄取率下降程度最小（P<0.001）,且VAT比SAT组下降程度更明显（P<0.001）;4)在胰岛素刺激后,相较于基础状态,不同部位脂肪组织诱导的肝细胞葡萄糖摄取率均升高（P<0.001）;4)。（四）CXCR2对不同部位脂肪组织诱导下的HepG2细胞糖原合成的影响:1)在基础状态下或胰岛素刺激下,与脂肪组织诱导下的HepG2细胞相比,脂肪组织诱导下转染CXCR2-siRNA的HepG2细胞,其糖原含量升高（P<0.001）;2)在基础状态下或胰岛素刺激下,与AT诱导下的HepG2细胞相比,AT诱导下转染CXCR2-过表达质粒的HepG2细胞,其糖原含量降低（P<0.001）;3)以HepG2组为基线,AT诱导下转染CXCR2-过表达质粒的HepG2细胞的糖原含量下降程度最大,AT诱导下的HepG2细胞的次之,AT诱导下转染CXCR2-siRNA的HepG2细胞的糖原含量下降程度最小（P<0.001）,且VAT 比 SAT组下降程度更明显（P<0.001）;4)在胰岛素刺激后,相较于基础状态,不同部位脂肪组织诱导的肝细胞糖原含量均升高（P<0.001）;5)倒置显微镜下,观察到HepG2的糖原分布情况与糖原含量测定结果相吻合。[结论]1)不同部位AT对肝细胞的葡萄糖摄取和糖原合成均存在影响,且VAT比SAT更能抑制肝细胞的葡萄糖摄取和糖原合成;2)CXCR2负向调控AT诱导下肝细胞的葡萄糖摄取和糖原合成,提示CXCR2是AT介导的肝细胞葡萄糖摄取障碍和糖原合成障碍的重要参与者,AT诱导的肝细胞CXCR2表达的增强可能干扰了肝细胞葡萄糖的正常摄取和糖原合成过程;3)胰岛素可改善脂肪组织诱导的肝细胞的葡萄糖摄取和糖原合成;4)IL-8及其受体CXCR2可能是肥胖相关的T2DM发生的重要机制。
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