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研究背景：HBV最原始模板是HBV cccDNA,而现有的抗病毒治疗难以清除肝细胞内HBV cccDNA。检测HBV cccDNA需要肝脏穿刺术,有风险及禁忌症,因此各大指南将与HBV cccDNA密切相关的HBsAg作为HBVcccDNA的替代指标而被用于制定终点标准。本团队建立的抗病毒治疗队列的研究显示NAs治疗后10年HBsAg累计清除率仅14%[1]。一项国外的研究发现HBV cccDNA与外周血HBsAg量仅呈现低度正相关[2]。因而,是否有其他的因素影响HBsAg的表达?PreS/S区基因变异是否会导致HBsAg的结构或功能改变,继而导致现有的检测HBsAg试剂灵敏性降低?而目前国内外如此相关的研究仅为是横断面上的探讨,且结果不一。目的：探讨CHB患者基线肝组织中HBVcccDNA的Pre S/S基因变异对NAs治疗后外周血HBsAg水平的影响。方法：研究对象：70例患者均来自本团队的NAs抗病毒治疗队列,所有的患者均符合以下入选标准：①慢性乙型肝炎患者,诊断符合《2010年中国慢乙肝防治指南》[3]标准；②应用NAs抗病毒治疗半年内获得病毒学应答(HBV<1000copies/ml)并维持3年以上；③治疗基线行肝穿刺,冻存有肝组织及各个时间点的血清标本；④随访过程中无病毒学反弹发生。排除标准：①合并丙型肝炎、丁型肝炎、艾滋病感染者。②乙型肝炎病毒携带者、急性肝炎、肝硬化、肝癌患者。③使用免疫抑制剂、干扰素者。实验方法：①收集患者治疗基线时、抗病毒治疗后第二年及第四年随访时的血清及抗病毒治疗前的肝穿组织。②水煮法提取研究对象基线的血清中rcDNA,再以rcDNA为模板,应用多对引物及巢式PCR方法检测患者的基因型。③滚环扩增(RCA)方法提取肝组织全长HBV cccDNA,以此为模板应用巢式PCR扩增肝细胞HBVcccDNA PreS/S基因,扩增产物送生物公司测序,将测序结果与NCBI中标准序列对比,寻找变异位点。④应ELISA方法(罗氏试剂检测盒)检测基线、抗病毒治疗后第2年及第4年血清HBsAg水平。分组方法：将抗病毒治疗后第2年至第4年HBsAg下降的幅度<2Log/mL分为A组,下降幅度>2 Log/mL为B组。统计方法：应用SPSS 13.0软件进行统计分析,独立样本t检验、单因素方差分析、Fisher’s精确检验分析可能影响NAs治疗后HBsAg水平变化的因素,卡方检验分析PreS/S突变对HBsAg水平的影响及可能影响PreS/S突变的因素,以P<0.05有统计学意义。结果：①11/70(15.70%)例发生Pre S区大片段碱基缺失,其中5例发生于Pre S1区,6例发生于Pre S2区。②C基因型患者中PreS基因缺失率明显高于B基因型患者(25%VS5.8%, P=0.028)。③PreS1区常见变异位点C2988在B组的发生率显著高于A组(90.19% VS52.63%, P<0.05), PreS2区常见变异位点A96在B组的发生率显著高于A组(84.31%VS52.63%, P=0.006)。④S区氨基酸sT126变异在B组中的发生率显著高于A组(33.33%VS5.26%,P<0.05)。结论：①C基因型患者较B基因型患者更易发生Pre S区大片段缺失变异。② HBV cccDNA PreS/S区C2988、A96点突变可能对HBsAg水平下降有一定影响。③S区氨基酸s1126变异可能影响现有检测HBsAg的试剂,导致检测结果低于真实值。④核苷酸类似物抗病毒治疗后血清HBsAg的下降不仅受HBVcccDNA的量及转录活性的影响,可能还受HBVcccDNA的PreS/S基因变异影响。