【摘 要】
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泡状棘球蚴病（Alveolar echinococcosis,AE）是由棘球绦虫属的多房棘球绦虫（Echinococcus multicularis,Em）的中绦期幼虫（也叫泡球蚴）寄生在中间宿主肝脏等部位引起的一种人畜共患寄生虫病,这种病仍然是世界性的一个的公共卫生问题。多房棘球蚴在中间宿主寄生的微环境呈现为低氧状态,且本实验室前期研究表明体外厌氧培养的泡球蚴生长发育比有氧时快,即泡球蚴良好的生
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泡状棘球蚴病（Alveolar echinococcosis,AE）是由棘球绦虫属的多房棘球绦虫（Echinococcus multicularis,Em）的中绦期幼虫（也叫泡球蚴）寄生在中间宿主肝脏等部位引起的一种人畜共患寄生虫病,这种病仍然是世界性的一个的公共卫生问题。多房棘球蚴在中间宿主寄生的微环境呈现为低氧状态,且本实验室前期研究表明体外厌氧培养的泡球蚴生长发育比有氧时快,即泡球蚴良好的生长发育依赖厌氧环境。在哺乳动物细胞中,感应体内氧压变化和维持氧平衡主要是由缺氧诱导因子HIF-1调控,它是一系列缺氧靶向基因的关键转录因子,由两个亚单位α和β组成的异二聚体。HIF-1还能参与多种信号通路,形成细胞低氧应答的多样性。值得注意的是,HIF-1的活性主要依赖HIF-1α亚基的稳定,所以,近年来低氧研究主要以HIF-1α为主。而在多房棘球蚴中并没有相关报道,本论文从以下五个方面对多房棘球绦虫的HIF-1α做了相关研究:1、通过将多房棘球绦虫数据库与其他典型哺乳动物的序列比对和分析发现可能编码HIF-1α蛋白的基因序列,其全长基因是通过cDNA末端快速扩增技术（RACE）获得,将它命名为Emhif-1α,与其它物种多重对比后发现其具有HIF-1α蛋白典型的保守结构域。三维结构分析表明EmHIF-1α与人类HIF-1α参与二聚体形成以及DNA结合域有相似的三级结构。2、以Emhif-1α全长片段作为抗原蛋白制备了多克隆抗体,通过Western b1ot对泡球蚴囊泡的EmHIF-1α表达情况做了检测分析,实验结果表明EmHIF-1α在泡球蚴囊泡中有表达。3、体外构建了人源重组HIF-1β质粒,将重组EmHIF-1α质粒和人源HIF-1β质粒共同转染进HEK293T细胞中,免疫共沉淀（Co-IP）实验结果显示多房棘球蚴EmHIF-1α能够与人源HIF-1β形成二聚体。4、构建了敲低hif-1α的慢病毒表达载体细胞株sh2-293T,且HIF-1α的转录和蛋白水平检测结果显示hif-1α干扰效率较高。将重组质粒EmHIF-1α转染进sh2-293T细胞株中检测epo mRNA的表达水平,结果显示epo mRNA水平在转染EmHIF-1α后显著升高,说明EmHIF-1α具有转录因子结合DNA的保守性功能。5、低氧诱导剂CoCl2处理体外培养的囊泡,检测到Emhif-1α的转录水平会随着处理时间上升,同时蛋白水平在CoCl2处理后也会升高。综上所述,多房棘球绦虫的EmHIF-1α存在与哺乳动物相似的二聚体结合能力和启动靶基因的功能,这表明EmHIF-1α具备同哺乳动物HIF-1α一样的转录因子活性。并且在CoCl2处理多房棘球蚴之后,EmHIF-1α的转录和蛋白水平产生了相应的变化,推测多房棘球绦虫EmHIF-1α在感应低氧信号中有重要功能。
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