【摘 要】
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洛伐他汀(Lovastatin)是微生物来源的羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂类降胆固醇药物。其主要的产生菌为土曲霉(Aspergillus terreus)、桔青霉(Penicillium citrinum)和红曲霉(Monasc
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洛伐他汀(Lovastatin)是微生物来源的羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂类降胆固醇药物。其主要的产生菌为土曲霉(Aspergillus terreus)、桔青霉(Penicillium citrinum)和红曲霉(Monascus ruber),土曲霉是工业生产中常用的菌种。 本文以实验室保藏的土曲霉菌株SIPI-L-H525为出发菌株,经自然分离,接种于种子培养基,种子液经倍比稀释,用超声波破碎处理,再用紫外线照射诱变;经初筛和复筛,获得一株较为稳定的高产菌株SIPI-L-U512。同时确定洛伐他汀的HPLC检测条件。 经单因素实验对发酵培养基的组成进行了优化,确定较适碳源为麦芽糊精、较适氮源为黄豆饼粉和玉米浆干粉。研究了摇瓶装液量、接种量、初始发酵液pH值、培养温度及添加不同的前体对洛伐他汀产量的影响。实验确定:装液量不宜过大,750ml摇瓶装液100ml发酵液较为合适;接种量14%时,生成的土曲霉菌丝球数量较多,菌丝量较大,洛伐他汀的产量较为理想;初始发酵液pH为6.5为宜;培养温度以28℃为宜;通过在发酵Oh添加柠檬酸三钠,产量提高了22%,说明柠檬酸三钠有利于洛伐他汀的生物合成过程。 初步研究了从发酵液中提取纯化洛伐他汀的工艺过程。发酵液经酸化处理后,离心得到菌体,烘干后过筛得到菌粉;用乙酸乙酯浸泡,乙酸乙酯相需用(NH4)2SO4溶液和草酸溶液洗涤两次;乙酸乙酯相经薄膜浓缩得到浆状物,于4℃结晶,得到粗晶体;再经粉末活性炭脱色和重结晶后得白色针状结晶,为lovastatin的纯品。
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