石蒜生物碱分析及其生物合成的初步研究

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本试验研究了石蒜的组织培养的条件,优化了石蒜中生物碱加兰他敏提取的条件,建立石蒜生物碱的薄层色谱分析方法,用液体培养法研究了加兰他敏、力可拉敏、石蒜碱对石蒜生物碱生物合成的影响,固体培养法研究了在石蒜组织培养芽的诱导过程中石蒜生物碱含量的变化及加兰他敏对其生物生物碱生物合成的影响。对石蒜生物碱的生物合成途径进行了初步的研究。主要内容如下:通过组织培养找到石蒜快速繁殖合适的条件。试验结果如下:MS+0.3 mg/LNAA +3.0 mg/L6-BA培养基是不定芽诱导的最佳培养基,MS+0.5 mg/L 6-BA+0.8 mg/LNAA是较好的生根培养基组合;加30%蛭石营养土最有利于幼苗的成活。在11月份进行组织培养最有利于石蒜鳞茎的快速繁殖。石蒜组织培养的季节性,属首次研究。通过单因素试验和正交试验得到如下较好的提取加兰他敏的试验条件:75%乙醇、微波处理时间60 S、浸取时间1小时、固液比1:10、微波功率480 W。用此方法研究了石蒜不同部位加兰他敏的含量,结果表明鳞茎中含量最高,其次为花梗、花、叶。这种方法耗时短,效率高,有利于研究石蒜生物碱生物合成时大批材料的处理。本试验研究了石蒜生物碱的单向和双向薄层色谱(TLC)分析法,结果表明单向TLC中以氯仿、甲醇、氨水配比9:1:0.2分离效果最好,分离斑点最多,且十分清晰;建立了以乙酸乙酯、甲醇、氨水配比9:1:0.2为第一向,氯仿、甲醇、氨水配比9:1:0.2为第二向的石蒜生物碱的双向薄层色谱分析法,分离效果更好,分离出的生物碱种类多,且都十分清晰。是分析石蒜生物碱的一种快速简便耗样量少的新方法。通过液体培养石蒜鳞茎圆片,研究了加兰他敏、力可拉敏、石蒜碱对石蒜生物碱生物合成的影响,结果显示,加兰他敏、力可拉敏和石蒜碱均能明显抑制石蒜生物碱的合成。推测石蒜中生物碱都来自一种共同的前体,加兰他敏、力可拉敏同属一条合成路线,其中生物碱d和e位于加兰他敏和力可拉敏之间,石蒜碱和生物碱i处于另一分支。试验还研究了在组织培养芽的诱导过程中,石蒜中各种生物碱的变化,除加兰他敏外均表现出先增加后减少的趋势,加兰他敏表现出一直增加的趋势。在培养基中加入加兰他敏后,表现出与液体培养鳞茎圆片一样的结果,生物碱的合成明显受到加兰他敏的抑制。此方法也可用于研究石蒜生物碱的生物合成。为石蒜生物碱生物合成的研究提供了另外一种方法。
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