槐耳浸膏联合重组人血管内皮抑素逆转人肺腺癌A549/DDP细胞耐药性的研究

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目的:探讨槐耳浸膏联合重组人血管内皮抑素(rh-Endostatin)对人肺腺癌A549/DDP细胞耐药性的逆转作用及其机制。方法:本实验采用人肺腺癌A549细胞及对顺铂(DDP)耐药A549/DDP细胞作为研究对象,将DDP分别与rh-Endostatin及槐耳浸膏以两药联合及DDP、rh-Endostatin、槐耳浸膏三药联合给药的方式以及DDP单独给药方式,作用于人肺癌细胞株A549及耐药细胞株A549/DDP,作用时间72小时,观察不同给药方式导致的同株细胞之间耐药性的不同及不同株细胞间耐药性的差别。1.MTT法计算DDP对A549细胞半数抑制率IC50,对A549/DDP细胞半数抑制率IC50,计算A549/DDP对DDP的耐药倍数。2.MTT法测出不同浓度rh-Endostatin及槐耳浸膏对A549/DDP细胞的抑制率,分别取对细胞无明显细胞毒作用的浓度作为逆转浓度。3.MTT法测出rh-Endostatin联合DDP、槐耳浸膏联合DDP以及三药联合方式对A549及A549/DDP细胞的DDP的IC50,计算逆转倍数。4.采用western blot法检测DDP单药组、DDP联合rh-Endostatin、DDP联合槐耳浸膏、三药联合用药组分别作用于A549/DDP细胞后的耐药蛋白P-gp、LRP表达情况。结果:1.MTT法显示,DDP对A549细胞IC50为0.79±0.06ug/ml,对A549/DDP细胞的IC50为13.3±0.9ug/ml,A549/DDP对DDP的耐药指数为16.8。浓度为400ug/ml的rh-Endostatin作用72小时对A549及A549/DDP细胞均无细胞毒性。浓度为0.4mg ml的槐耳浸膏作用72小时对A549及A549/DDP细胞均无细胞毒性。2..rh-Endostatin联合DDP对A549细胞的IC50为0.31±0.04ug/ml。rh-Endostatin联合DDP对A549/DDP细胞IC50为2.57±0.04ug/ml。逆转倍数5.18。槐耳浸膏联合DDP对A549细胞IC50为0.48±0.02ug/ml。槐耳浸膏联合DDP对A549/DDP细胞IC50为4.21±0.02ug/ml。逆转倍数3.16。rh-Endostatin及槐耳浸膏联合DDP对A549细胞的IC50为0.22±0.04ug/ml。rh-Endostatin及槐耳浸膏联合DDP对A549/DDP的IC50为1.73±0.04ug/ml。逆转倍数7.69。3.Western blot结果显示:三药联合组A549/DDP细胞的P-gp、LRP蛋白表达水平较细胞对照组及DDP单药组明显降低(P=0.00,有统计学意义);三药联合组P-gp和LRP表达水平低于rh-Endostatin联合DDP组(P=0.012,有统计学意义)及槐耳浸膏联合DDP组(P=0.031,有统计学意义)。结论:1. rh-Endostatin及槐耳浸膏均能逆转人肺腺癌A549/DDP对DDP的耐药性,其机制可能与A549/DDP细胞内P-gp、LRP的蛋白表达量降低有关。2. rh-Endostatin及槐耳浸膏联合应用较二者单独应用对人肺腺癌A549/DDP耐药性的逆转作用增强。
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