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目的：本研究建立了一种非病毒型人肝细胞生长因子（Human hepatocytegrowth factor, HGF）的基因治疗方式，避免病毒载体基因治疗所导致的副作用[1]。通过定性及定量检测体外培养的人成纤维细胞中HGF的表达及其体内应用，为HGF治疗脱发、促进毛发再生的临床应用提供一个前景良好的实验依据。方法：克隆人的hHGF全长cDNA片段，插入pTARGET真核表达载体中，得到pTARGET-HGF质粒。采用脂质体lipofectamin2000包裹重组质粒将其转染到体外培养的人的皮肤成纤维细胞中（Human skin fibroblasts,HSF）。由于本研究室之前已经构建成功的pEGFP-N1-HGF含有报告基因绿色荧光蛋白（GFP），在荧光显微镜下观察转染率具有直观性，所以在探索最佳细胞接种密度、DNA浓度和脂质体浓度等因素时，用pEGFP-N1-HGF得到的最佳转染率作为参考。采用蛋白质印记方法（western blot）、酶联免疫吸附测定法（enzyme-linked immunosorbentassay, ELISA）分别进行HGF蛋白表达的定性定量检测后，将其通过皮下注射应用于小鼠体内，通过HE染色、免疫组化（Immunofluorescence staining）检测HGF在小鼠皮肤内的表达。结果：1.质粒构建成功后，双酶切结果：经去内毒素提取纯化质粒后，BamHI、SalI进行双酶切、琼脂糖凝胶电泳进行鉴定后，可得到5.67kb和2.2kb两个片段，与pTARGET质粒的图谱相符，证明所得到的质粒为重组子pTARGET-HGF。2.经传代培养的成纤维细胞在达到对数期的良好生长状态，既80%的细胞达到融合后，转染目的质粒pTARGET-HGF、pEGFP-N1-HGF，在荧光显微镜下观测到经pEGFP-N1-HGF质粒转染后的细胞发出绿色荧光，得到细胞接种密度为3.0×105，DNA浓度为0.8μg，脂质体用量为4.5μL时获得最高转染率，分别为57.35±1.29%、52.47±1.26%和57.73±1.31%。3.体外转染细胞后，采用western blot证明重组的pTARGET-HGF基因在成纤维细胞中有所表达，同时提取转染后的细胞上清液，经ELISA鉴定后检测到hHGF在转染到人的皮肤成纤维细胞后可以分泌出hHGF，其分泌量达到（5.76~10.74ng/9×105cells）。将其用于体内后，发现实验组与对照组相比，毛囊生长明显浓密，且经免疫组化检测到HGF在皮肤中的表达。结论：成功构建含有HGF基因的真核载体pTARGET-HGF，并将其应用于体外试验中，检测到其表达及分泌后，再将其用于体内，发现小鼠的毛囊发育有明显的改善。由此可证明HGF具有生发的作用。