【摘 要】
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凉茶或草药茶是一种民间流传甚广、具有促进健康、预防或者治疗疾病的功能性饮料。本研究选取复方抗炎凉茶包含甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch.)、菊花(Chrysanthemum morifolium Ramat.)、金银花(Lonicera japonica Thunb.)、鸡蛋花(Plumeria rubra L.)、布渣叶(Microcos paniculata L.)
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凉茶或草药茶是一种民间流传甚广、具有促进健康、预防或者治疗疾病的功能性饮料。本研究选取复方抗炎凉茶包含甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch.)、菊花(Chrysanthemum morifolium Ramat.)、金银花(Lonicera japonica Thunb.)、鸡蛋花(Plumeria rubra L.)、布渣叶(Microcos paniculata L.)和夏枯草(Prunella vulgaris L.)6种中药饮片原料作为本研究材料。通过LC-MS检测,验证了所用中药饮片的品质均符合规定标准。随后总结前人和自身实践经验制定出一套标准的凉茶煎煮方法,保证不同批次凉茶煎煮液质量的均一性和稳定性。在经典的侵染型炎症级联反应过程中,内皮细胞产生的MCP-1、IL-8等趋化因子调控淋巴细胞的定向移动,同时需要借助内皮细胞表面的ICAM-1介导淋巴细胞粘附和迁移,这些因子的表达情况直接反映了细胞的炎症水平。体外抗炎试验结果表明,LPS诱导细胞表面ICAM-1表达量,以及MCP-1和IL-8的分必量显著增加。但是,0.2 mg/m L的菊花提取物、0.2 mg/m L的金银花提取物以及0.4 mg/m L的夏枯草提取物均显著抑制了LPS对HMEC-1细胞表面ICAM-1的诱导表达作用。菊花、金银花、夏枯草和鸡蛋花提取物表现出抑制HMEC-1细胞对IL-8的分泌,且相对于LPS组具有显著性。六种凉茶提取物均能显著降低MCP-1的表达。通过q-PCR试验技术,结果显示凉茶提取物对ICAM-1、IL-8、MCP-1和VCAM-1基因的表达调控作用与蛋白表达趋势一致。初步认定菊花、金银花和夏枯草是复方凉茶的主要抗炎活性成分。在细胞水平上,单独使用甘草和布渣叶提取物对预防炎症没有帮助。细胞活力的测定是确定细胞维持或恢复生存力的能力的测定。六种原料中,布渣叶提取物对HMEC-1有较大的细胞毒性,以植物提取物冻干粉末计,0.1 mg/m L的布渣叶提取物孵育HMEC-1细胞24 h即可显著降低细胞活力;菊花、金银花和夏枯草提取物超过0.8 mg/m L的浓度下表现出对HMEC-1细胞活力的显著抑制作用;相比之下,甘草和鸡蛋花提取物在0.1 mg/m L-1.6 mg/m L的浓度范围内均表现出对HMEC-1细胞活力的促进作用。单独的布渣叶提取物不仅对细胞有较大的细胞毒性,而且对预防炎症没有帮助。为了探索布渣叶在复方中发挥的作用,借鉴复方药物使用经验,将布渣叶提取物与复方中其余五种提取物一一联合使用,检测其对HMEC-1细胞活力的影响。结果显示,相比于单独布渣叶提取物,只有与甘草提取物联合使用才可以显著提高细胞活力。继而在Hela、U251、MDA-MB-231和HUVEC细胞上都得到了同样的结果,意味着甘草提取物可以显著减轻布渣叶提取物对细胞的毒性。此外,尽管单独的甘草提取物对预防炎症没有帮助,但是通过与甘草提取物的联合使用,显著提高了菊花、金银花和夏枯草提取物的抗炎能力,联合后相比于单独的菊花或者夏枯草提取物,对ICAM-1的抑制能力有显著提高;相比于单独的金银花提取物,对IL-8和MCP-1的抑制能力有显著提高。小鼠试验进一步丰富了细胞试验结果。凉茶的过量或者长期饮用导致C57BL6小鼠食欲不振,体重下降。单独菊花和金银花提取物连续10 d灌胃后小鼠体重均有下降,灌胃提取物浓度越高,小鼠体重下降越明显。0.4 g/kg的金银花提取物和0.4g/kg的菊花提取物组小鼠,灌胃10 d后平均体重达到了各自小组第1 d平均体重的75%和90%。然而通过与甘草提取物的联用,减缓了小鼠体重的下降,菊花0.1 g/kg联合甘草0.4 g/kg组小鼠平均体重还逐天上升,在第10 d达到了第1 d平均体重的110%,进一步说明了与甘草提取物的联合用药可减轻毒副作用。不仅如此,菊花和甘草的联合能更好的发挥菊花的抗炎活性,相对于单独的菊花提取物,菊花和甘草的联合提取物在钝化炎症反应,降低外周血中单核细胞和中性粒细胞的数目,调控机体CD4+/CD8+比值的稳定均有更好的表现。
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