甘蔗（Saccharum officinarum）是我国主要能源和糖料作物,在国内广为种植,但甘蔗病毒病严重影响其品质和产量。其中甘蔗线条花叶病毒（sugarcane streak mosaic virus,SCSMV）是甘蔗病毒病的主要病原之一,属于马铃薯Y病毒科（Potyviridae）禾草病毒属（Poacevirus）。为丰富SCSMV血清学检测手段,本研究从感病甘蔗样品中分离获得HC-Pro基因,构建重组质粒pET28a-HC-ProSCSMV,对重组质粒进行蛋白的原核表达与纯化,通过免疫新西兰大白兔,获得HC-Pro多克隆抗血清。经过对田间甘蔗样品的Western blot检测、酶联免疫吸附测定（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）以及斑点印迹杂交（Dot-blot hybridization）,验证了抗血清的高特异性和强灵敏度,能够用于SCSMV的检测。在本实验室之前的研究中已经明确SCSMV P1蛋白为病毒的沉默抑制子和致病决定因子,本研究发现SCSMV HC-Pro蛋白能够减弱P1蛋白的沉默抑制活性,同时与HC-Pro农杆菌共浸润的P1蛋白致病力明显减弱,发病时间也有所减缓。经过双分子荧光互补和酵母双杂交实验发现两者不直接互作,因此,HC-Pro蛋白对P1蛋白功能的影响机制还需深入研究。本研究分别从体内和体外验证了 P1蛋白的磷酸化,再经过生物信息学网站预测以及质谱分析,选定了 P1的潜在磷酸化位点。构建这些位点的非磷酸化突变体和模拟磷酸化突变体,通过对P1突变体沉默抑制活性、亚细胞定位情况以及致病力的测定,初步确定T5A、T197A和S286A这三个位点是P1的磷酸化位点。本研究还找到了能够磷酸化P1蛋白的植物内源激酶高粱CIPK06,通过双分子荧光互补和酵母双杂交实验明确了 P1能够与高粱CIPK06互作。将高粱CIPK06、P1及其突变体构建至原核表达载体,通过重组质粒的原核表达与纯化得到相应蛋白进行体外磷酸化和磷酸酶抑制实验,再次证明了高粱CIPK06能够磷酸化P1蛋白以及三个位点为P1的磷酸化位点,同时还验证了高粱CIPK06磷酸化依赖于Mn2+。综上所述,本研究基于HC-Pro多克隆抗血清建立的SCSMV检测体系丰富了甘蔗病毒病的田间检测方法,具有快速高效、特异灵敏的优点。同时验证了HC-Pro蛋白能够减弱P1蛋白的沉默抑制活性和致病力,且HC-Pro不是通过互作的方式影响P1的功能,并验证了 P1蛋白能够发生磷酸化修饰,明确了其磷酸化位点,对P1磷酸化修饰后的生物学功能进行了初步探究。