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保护家禽遗传变异对于提供家禽育种素材、节约活体保种的土地、以及保护生物多样性等领域有重要作用,但目前甘油细管冷冻技术方法复杂,DMA颗粒冷冻技术则不利于精液的长期保存,且标识不方便。本研究以DMA为冷冻保护剂,采用单只公鸡精液,设计了4个试验:1)研究了黑凤鸡、湘妃土鸡、白莱航和青脚麻鸡的品种、个体以及个体在不同时期精液抗冻性差异;2)采用黑凤鸡和湘妃土鸡稀释后的精液分成AB两组,用不同DMA添加方法进行对比实验(A组直接添加DMA;B组将DMA添加在稀释液中并冷冻起来);3)对黑凤鸡和湘妃土鸡进行DMA颗粒与细管冷冻精液的对比实验;4)添加过氧化氢(Catalase,CAT)、番茄红素(lycopene,LP)、N-乙酰半胱氨酸(N-Acetyl-L-cysteine,NAC)3种抗氧化剂研究对黑凤鸡冷冻精液的保护作用。实验结果如下:1、精液抗冻性差异研究通过三个多月的试验,同一个人用同一种检测方法对45只不同品种(黑凤鸡、湘妃土鸡、青脚麻鸡和白莱航)的公鸡进行共609次单只公鸡冷冻精液的研究,结果发现:个体与个体、品种与品种以及同一个体不同时期冻后活力存在差异,四个品种之间黑凤鸡的平均冻后活力最好,达到0.5,湘妃土鸡次之,而青脚麻与白来航鸡最差,白来航鸡冻后活力为0.38。通过实验得出公鸡精子的抗冻性与不同品种、同一品种不同个体、同一个体不同时期精液品质都存在差异。2、DMA添加方法研究研究采用黑凤鸡和湘妃土鸡,将精液1:1稀释,镜检,留下合格的精液平衡30min,分成AB两组,A组直接添加6%的DMA。B组(实验前将DMA按18%的浓度添加在稀释液里进行冷冻保存,备用)。直接添加含有DMA的稀释液,添加比例为1:0.5。实验结果表面:黑风鸡和湘妃土鸡两个品种A、B两组差异不显著,但B组活力比A组好。B组通过稀释后再添加DMA,减少了DMA对鸡精子的毒害打击,提高了冻后活力,大幅度简化了操作。3、鸡DMA精液冷冻剂型比较研究试验以DMA为冷冻保护剂,采用优化后的DMA添加方法,将同一份精液同时制作成颗粒和细管,进行对比实验。结果发现:黑凤鸡和湘妃土鸡两个品种的冻后活力比较,DMA细管略高DMA颗粒。同时通过黑凤鸡三次人工授精得出DMA细管最高受精率达到了77.61%,孵化率71.64%。本实验将DMA细管优化出来,建立了鸡精液DMA细管冷冻保存技术。4、抗氧化剂对鸡精液冷冻保护作用研究采用黑凤鸡,将镜检合格后的精液平均分成4~5份,按不同浓度单独添加抗氧化剂(过氧化氢(Catalase,CAT)、番茄红素(lycopene,LP)、N-乙酰半胱氨酸(N-Acetyl-L-cysteine,NAC),冷冻、解冻并进行人工输精。结果表明,在冷冻液中添加CAT、LP和NAC对鸡精液冷冻保护作用不明显。本文对以DMA为冷冻保护剂的鸡冷冻精液个体差异、制作系统方法以及抗氧化剂的保护作用等进行了比较研究,创新了冷冻保护剂的添加方法与含冷冻保护剂稀释液的保存方法,优化后的DMA细管冻精受精率达到国内领先,且制作方法优于国内外的报道。