【摘 要】
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肠外致病性大肠杆菌(Extraintestinal Pathogenic Escherichia coli,Ex PEC)是一种重要的人畜共患病原菌,具有特殊的毒力基因且宿主广泛,其危害程度高于肠道E.coli。Ex PEC感染可导致人类和动物的脑膜炎、败血症、肾炎、肺炎等。目前对于大熊猫源E.coli的研究主要集中在肠道,而对于大熊猫源Ex PEC的研究,国内外鲜有报道。本研究从大熊猫肠外器官分
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肠外致病性大肠杆菌(Extraintestinal Pathogenic Escherichia coli,Ex PEC)是一种重要的人畜共患病原菌,具有特殊的毒力基因且宿主广泛,其危害程度高于肠道E.coli。Ex PEC感染可导致人类和动物的脑膜炎、败血症、肾炎、肺炎等。目前对于大熊猫源E.coli的研究主要集中在肠道,而对于大熊猫源Ex PEC的研究,国内外鲜有报道。本研究从大熊猫肠外器官分离到9株疑似Ex PEC,在对其进行鉴定、分子分型的基础上,进一步开展致病性和耐药性分析,以期为大熊猫Ex PEC感染的临床用药和致病机制的阐释提供参考。本研究通过形态学观察、16S r RNA基因序列分析和Ex PEC特异性PCR检测,9株大熊猫源肠外器官分离菌均为Ex PEC。经系统进化群检测表明8株菌为B2群,1株为A群。MLST和PFGE分析发现9株大熊猫源Ex PEC分别分为ST127、ST555、U10和Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型3种分子分型,其中ST127与Ⅰ型分别为主要ST型和PFGE基因型(6/9)。根据分子分型结果,选择主要分型ST127/PFGE基因Ⅰ型代表菌株Ex PEC02,采用腹腔注射方式感染小鼠,探究其致病性。结果表明,Ex PEC02对小鼠具有明显致病性,LD50为8.9×10~7 CFU/m L。Ex PEC02感染后可在小鼠多器官分布,72 h内载菌量总体呈上升趋势,其中心、肝、脾的载菌量较高。Ex PEC02对小鼠心、肝、脾、肺、肾、脑均造成较为明显的病理损伤:心肌纤维发生颗粒变性,肝细胞、肾小管上皮细胞表现为水泡变性、坏死,脾髓中巨噬细胞和多核巨噬细胞增多,神经元固缩,坏死,出现“噬神经元”现象。采用纸片扩散法(K-B法)对9株大熊猫源Ex PEC进行25种抗生素敏感性检测,发现100%的菌株对青霉素和氨苄西林耐药;78%的菌株对头孢克洛、羧苄西林耐药;67%的菌株对头孢氨苄、妥布霉素、卡那霉素和复方新诺明耐药;100%的菌株对亚胺培南、多粘菌素B、左氧氟沙星和萘啶酸敏感。采用超高通量荧光定量PCR法进行ARGs的检测,共检出35种ARGs,以β-内酰胺类为主,且ARGs数量与耐药率之间呈正相关,其中bla CMY2-01、bla CTX-M-01、bla SHV-01、cph A-01、Amp C-01、fox5、tet D-02、opr D、acr R-01、mex F、acr A-01、czc A、IS26和mcr1检出率100%,主要以抗生素失活和外排泵两种耐药机制介导耐药。
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