【摘 要】
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(一)极端嗜热古菌硫矿硫化叶菌α-淀粉酶基因的克隆与表达.硫矿硫化叶菌（Sulfolobus solfataricus P2、以下简称P2菌）属于极端嗜热古菌,首次分离于意大利一个硫磺矿热泉中,形态
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(一)极端嗜热古菌硫矿硫化叶菌α-淀粉酶基因的克隆与表达.硫矿硫化叶菌（Sulfolobus solfataricus P2、以下简称P2菌）属于极端嗜热古菌,首次分离于意大利一个硫磺矿热泉中,形态为球形,有叶状分裂,嗜热嗜酸,最佳生长温度为80℃,最适pH值为3.兼性自养,可以硫磺或其它简单有机物为养分.通过PCR扩增,从硫矿硫化叶菌P2基因组DNA中扩增到一个1.3kb大小的片段,将其克隆到pGEM-T easy vector 上进行测序,测序结果表明克隆到的基因片全长134bp,编码447个氨基酸,推算分子量为53.56kD,与P2菌基因组序列报道完全一致.将该基因构建在带有T7启动子的原核表达载体pET-21A(+)的EcoR1位点,经IPTG诱导使其在大肠杆菌BL21中得到融合表达.经SDS-PAGE电泳可检测出特异表达的蛋白质条带,其大小为56KD,与氨基酸序列推断的分子量相似.（二）阴沟肠杆菌（Enterobacter cloacae YW2112）神经节苷脂内切糖苷酶研究.该研究从土壤微生物中筛选得到一株产神经节苷脂内切糖苷酶的菌株YW2112,该酶能特异性水解神经节苷脂中连接神经酰胺和寡糖链之间的糖苷键,是研究神经节苷脂结构与功能的重要工具.对分离菌株YW2112其进行了形态、生理生化鉴定及16SrDNA鉴定.菌株YW2112为细菌,革兰氏染色阴性,直杆状,鞭毛周生,菌体大小为0.6-1μm×1-3μm,V-P实验阳性,甲基红阴性,利用葡萄糖产酸产气.以16SrDNA同源性为基础构建了包括11株相关种属细菌在内的系统发育树,在系统发育树中,分离菌株YW2112与Enterobactercloacue 在同一分支,二者的序列相似性为98,6﹪,结合形态和生理生化鉴定,将其鉴定为阴沟肠杆菌（Enterobacter cloacae）.同时以质粒PUC19为载体、大肠杆菌DH5a为受体菌.构建了大小为1×10<6>的YW2112基因组文库,以备进一步研究.
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