重组类人胶原蛋白离子交换分离及动力学的研究

来源 :西北大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hgra_1982
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本文主要研究重组类人胶原蛋白(HCB)的纯化工艺。基因工程菌Escherichia coli BL21经细胞破碎、沉淀、超滤浓缩,得到HCB的粗品,然后再通过离子交换法进一步纯化,获得高纯度的类人胶原蛋白。通过对阳离子交换剂CM-1和CM52两种树脂吸附杂蛋白的性能进行了比较,得出CM-1纯化后的效果优于CM52,CM-1纯化类人胶原蛋白的工艺为:进料浓度为4mg·mL-1,用pH6.5,NaCl浓度为0.03mol·L-1,20mmol·L-1的磷酸盐缓冲液配制,吸附时间为1h,在此条件下HCB的纯度可达到82.1%,回收率为84.2%。阴离子交换剂Fractogel EMD DEAE对HCB的吸附平衡研究表明:HCB在Fractogel EMD DEAE上的吸附基本符合Langmuir方程;pH、NaCl浓度对Langmuir方程参数影响较大;pH值对吸附剂吸附性能的影响是复杂的,随着pH值增加(pH>pI),吸附容量上升,解离常数降低,但由于离子交换剂的配基、HCB的性质等因素限制,pH值不能太大;随着NaCl浓度增大,吸附容量减小,解离系数Kd增大;温度对Langmuir方程参数的影响较小。以Fractogel EMD DEAE对HCB的吸附平衡数据为基础,优化了Fractogel EMD DEAE对HCB的纯化工艺。离子交换柱层析的操作条件:HCB粗品的起始进样浓度为4mg·mL-1,以pH8.0,50mmol·L-1的Tris-HCl缓冲液溶液配制,以3.0mL·min-1过柱吸附,再采用逐次洗脱方法,可获得HCB的纯度为96.8%,回收率为80.4%。以Fractogel EMD DEAE吸附HCB的动力学研究表明:孔扩散模型能够较好地描述HCB在Fractogel EMD DEAE上的动态吸附行为;随着溶液中离子强度的增加,孔扩散系数Dp,p也在逐渐增加;蛋白质初浓度与孔扩散系数存着一定的关系,蛋白质初始浓度升高,孔扩散系数减小。
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