苏云金杆菌几丁质酶的分布及chiA、chiB基因的克隆和异源表达

来源 :南开大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:babygnus
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
几丁质酶有抑真菌和杀虫增效的作用。因此苏云金芽孢杆菌(简称Bt)几丁质酶的研究对于扩大Bt制剂的作用范围,增强其杀虫作用有重要的意义。 本文利用几丁质平板法和chiB特异引物PCR两种方法检测了445株苏云金芽孢杆菌。平板检测结果表明,被测菌株都可以在以胶体几丁质为唯一碳源的培养基上生长,证明Bt菌株普遍含有几丁质酶。71.3%的菌株可以产生明显水解圈,其中16.4%的菌株能产生较大的水解圈,具有较高的几丁质酶活性。基因检测的结果表明91.7%的菌株含有chiB基因。实验分别从酶水平和基因水平证明几丁质酶及其基因在Bt普遍存在。 通过分析Bt几丁质酶与其血清型和杀虫晶体蛋白(ICP)的关系证明,几丁质酶活性的高低与这两者之间没有必然联系。对峙法检测了54株几丁质酶活性较高的苏云金芽孢杆菌,筛选到12株抑小麦赤霉菌效果好的菌株。@2 以苏云金芽孢杆菌科默尔亚种15A3(Bt 15A3)菌株基因组DNA为模版,用touchdown PCR方法扩增几丁质酶ChiA和ChiB的全基因序列(GenBank登录号:EF 103273和DQ 512474)。将PCR产物连接pUCm-T克隆载体,分别转化E.coli XL-Blue,获得重组质粒pUCm-cMA和pUCm-ch/B。经核苷酸及对应氨基酸序列分析证明,chiA基因全长1426bp,含有343 bp的上游非编码区和1083 bp的ORF,编码360个氨基酸。推测蛋白分子量36kD,只有一个几丁质酶催化域。chiB基因全长2279 bp,含有248 bp的上游非编码区和2031 bp的ORF,编码676个氨基酸。推测蛋白分子量71kD,具有三个相关结构域。 在有无诱导物的培养基中分别培养E.coli(pUCm-chiA)和Ecoli(pUCm-chiB)发现,克隆的几丁质酶基因可以利用本身的启动子异源表达各自分子量的蛋白,不需要几丁质作为诱导物。证明Bt.15A3中两种几丁质酶是组成型表达。 ChiA和ChiB几丁质酶的最适pH为5.5左右。最适温度为55℃左右,并且两种酶对pH和温度的适应能力较强,pH9.0时有50%的酶活力,温度在70℃时,保持60%的酶活力。Mn<2+>能够抑制ChiA和ChiB的几丁质酶活性,Ca<2+>则对ChiA有促进作用,对ChiB有抑制作用。 异源表达的ChiA和ChiB,对黑曲霉的孢子萌发和菌丝生长有抑制作用,并可以提高Vip蛋白对甜菜夜蛾的杀虫活性。
其他文献
关于巨基叶蜂亚科(Megabelesesinae)和基叶蜂亚科(Belesesinae)的系统发育学位置不同学者也持不同的意见。本研究主要以叶蜂科中的巨基叶蜂亚科和基叶蜂亚科的一些代表属中的
多糖和D-甘露醇是蛹虫草重要的活性物质。由于野生蛹虫草资源比较匮乏,而深层发酵生产蛹虫草多糖和D-甘露醇具有培养时间短、质量指标易控制等优点,已成为获得多糖和D-甘露醇的主要技术。本文主要对蛹虫草液体发酵培养基的组成和多糖、D-甘露醇发酵条件进行了优化,并构建了多糖和D-甘露醇的发酵动力学,最后对蛹虫草菌丝体多糖和D-甘露醇的提取方法进行了研究,并制备了两种产物的粗产品。主要结果如下:1.通过单因
摘要:在小学数学教学中,教师应当重视学生的数学学习策略、数学学习思维模式以及数学学习的情感和个体之间的差异性,使学生形成良好的学习习惯,进而培养学习能力,最终促进所有学生的全面发展。为此,对小学数学教学中的一些重要事项进行了阐述。  关键词:小学数学;教学;学习小学阶段是学生接受知识的基础阶段,也是学生思想的启蒙阶段,对学生今后发展有着重要作用。小学数学是小学阶段的一门重要课程,在一定程度上决定了
水分是我国北方小麦生长的限制因子。小麦在不同生育期经常受到水分胁迫的影响,从而导致粮食减产。本研究选用不同小麦品种,采用盆栽试验,通过水分胁迫处理以及剪叶、包穗、包茎处理,研究了水分亏缺下不同器官光合产物对籽粒产量的贡献以及穗轴显微结构的变化,测定了水分亏缺下小麦不同生育期叶片保护酶活性、蔗糖磷酸合成酶(SPS)的活性以及光合特性等生理指标。获得以下主要研究结果:1.剪叶、包穗、包茎等处理研究结果
摘要:语音教学是语言教学的重要内容之一。语音学习的目的是让学生拥有两种能力:一是看其形能读其音,听其音能拼其形,牢固建立音与形之间的联系;二是能说比较标准和流利的英语。重视语音教学,让学生能自信,轻松地学习英语。  关键词:语音;拼音;听音知形;见形知音语音既是语言的物质外壳,又是语言的内核,它是口语交际最基本的物质单位,也是语言音、形、义三要素中的首要因素。从《英语课程标准》对英语与语音的要求可
目的对珍珠梅进行化学成分及其对肝癌HepG-2细胞增殖的影响。方法采用硅胶柱色谱法从珍珠梅的氯仿提取部位进行分离纯化,通过理化常数和光谱分析鉴定化合物结构;采用MTT比色法观察从珍珠梅中分离得到的新化合物5,2′,4′-三羟基-6,7,5′-三甲氧基黄酮抑制肝癌HepG-2细胞增殖;采用流式细胞仪检测珍珠梅对HepG-2细胞周期分布的影响,同时结合倒置显微镜、HE染色观察细胞的形态学变化。结果从珍