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研究目的:1.明确博来霉素(bleomycin,BLM)诱导肺纤维化小鼠(C57BL)肺组织中CXXC5表达情况及在CD4/CD40L通路中的表达情况。2.探讨CXXC5过表达对BLM诱导的C57BL/6小鼠肺纤维化及CD4/CD40L通路的影响。3.探讨BLM诱导的肺纤维化小鼠中,CXXC5是否经CD40/CD40L通路来抑制上皮-间质转化(EMT)来抑制肺纤维化。研究方法:1.构建含绿色萤光蛋白(Greenfluorescenceprotein,GFP)的CXXC5过表达的腺病毒表达载体。2.分组:随机将小鼠分为6组:生理盐水组(M组)、纤维化组(B组)、生理盐水+Ad-GFP组(M+Ad-GFP组)、生理盐水+Ad-CXXC5组(N+Ad-CXXC5组)、纤维化+Ad-GFP组(B+Ad-GFP组)、纤维化+Ad-CXXC5组(B+Ad-CXXC5组),构建肺纤维化小鼠模型,并于造模后第7、14、28天脱颈处死小鼠,留取肺组织标本供实验用。3.肺组织进行HE染色和Masson染色,显微镜下观察纤维化程度,进一步行Ashcroft纤维化评分并测定羟脯氨酸含量。4.对各组小鼠肺组织进行RT-qPCR,检测CXXC5 mRNA、CollaⅠmRNA、CollaIIImRNA的表达。5.对各组小鼠肺组织进行Western Blot,检测CXXC5、CD40、CD40L、Fibronectin、Keratin-14的表达量。6.ELISA法测出各组肺组织中CollaⅠ和CollaⅢ的表达量。研究结果:1.构建出CXXC5过表达的腺病毒表达载体,并构建了BLM诱导的肺纤维化小鼠模型。2.对肺组织进行HE染色、Masson染色及纤维化评分,测定羟脯氨酸含量,我们发现B组与M组相比,肺纤维化程度明显加重;N+Ad-GFP、B+Ad-GFP分别与M组、B组相比,肺纤维化程度未见明显变化,说明绿色萤光蛋白对肺纤维化无影响;B组、B+Ad-GFP组比B+Ad-CXXC5组肺纤维化程度明显加重,说明CXXC5的过表达能抑制肺纤维化进展。3.经对各组小鼠在三个时间点BALF中细胞总数、巨噬细胞百分比(MACR%)及中性粒细胞百分比(NEUT%)的变化的比较,我们发现在7、14、28天,M+Ad-CXXC5组与M组、M+Ad-GFP组相比,上述指标均无明显差异;B组与M组相比,肺泡灌洗液中细胞总数、NEUT%明显增高,而MACR%显著低于M组;B+Ad-CXXC5组与B组、B+Ad-GFP组相比,细胞总数及NEUT%均明显降低,而MACR%较两组显著升高。4.Western blot检测小鼠肺组织中CXXC5及CXXC5相关蛋白表达。我们发现M组与B组在三个时间点相比,B组间充质细胞标记物Fibronectin及胶原成分CollaⅠ、CollaIII的表达较M组显著升高,上皮细胞标志物Keratin-14表达明显降低,CXXC5显著降低,CD40/CD40L信号通路相关蛋白CD40、CD40L表达量明显增加。M组和M+Ad-GFP组比较、B组和B+Ad-GFP组分别在三个时间点比较,肺组织中CXXC5、Fibronectin的表达水平未见明显变化。B组、B+Ad-GFP组与B+Ad-CXXC5组在三个时间点相比,Fibronectin的表达明显增加,CXXC5明显降低,CD40/CD40L信号通路相关蛋白CD40/CD40L表达量明显增加。5.RT-qPCR测CXXC5 mRNA、CollaⅠmRNA、CollaⅢmRNA表达发现,B组CXXC5 mRNA、CollaⅠmRNA、CollaⅢmRNA的表达较M组显著升高。M组和M+Ad-GFP组比较、B组和B+Ad-GFP组分别在三个时间点比较,肺组织中CollaⅠmRNA、CollaⅢmRNA的表达水平未见明显变化。B组、B+Ad-GFP组与B+Ad-CXXC5组在三个时间点相比,CollaⅠmRNA及CollaⅢmRNA的表达明显增加。6.ELISA法测各组肺组织中CollaI、CollaIII的表达发现,B组CollaI、CollaIII的表达较M组显著升高。M组和M+Ad-GFP组比较、B组和B+Ad-GFP组分别在三个时间点比较,肺组织中CollaI、CollaIII的表达水平未见明显差异。B组、BLM+Ad-GFP组与BLM+Ad-CXXC5组在三个时间点相比,CollaI、CollaIII的表达明显增加。研究结论:1.博来霉素诱导肺纤维化C57BL小鼠肺组织中CXXC5表达降低。2.博来霉素诱导肺纤维化C57BL小鼠肺组织中CD4/CD40L通路表达增加。3.CXXC5过表达经抑制CD4/CD40L通路抑制博来霉素小鼠EMT的发生,进而影响纤维化进展。4.CXXC5过表达抑制了纤维化进展,可能作为肺纤维化治疗提供新靶点。