流式细胞术研究血小板微粒膜蛋白

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目的:建立用流式细胞仪检测血小板微粒(platelet microparticle,PMP)膜蛋白的方法;比较不同浓度的激活剂激活血小板形成的血小板微粒膜上表达PAC-1、CD62p的差异;探讨血小板微粒膜蛋白与冠心病、高血压病间是否存在一定的联系;探讨服用抗血小板药物后血小板微粒膜蛋白的动态变化,为心血管疾病的抗血小板治疗的疗效观察提供新的手段。 方法:①10例正常健康人,抽取静脉血,以枸橼酸钠抗凝,离心得富血小板血浆,分别以不同浓度的ADP(5μM、10μM、20μM)、凝血酶(0.1U/ml、0.5U/ml、1U/ml)、胶原(5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml)作诱导剂,激活同一标本中的血小板,比较其血小板微粒表达PAC-1和CD62p的情况;②收集12例冠心病病人、10例高血压病人标本,提取富血小板血浆,以20LlM ADP为血小板激活剂,激活血小板,检测其血小板微粒表达PAC-1和CD62p的情况;③临床诊断冠心病病人9例,口服抵克利得,每次250mg,第一、二天每天2次,以后每天一次,持续服药6天。在服药前、服药后4d、服药后5d、服药6d、停药后3d、停药后4d收集标本,以20μM ADP为血小板激活剂,激活血小板,分析其血小板微粒表达PAC-1和CD62p的变化。 结果:①ADP、凝血酶、胶原三种激活剂作用下,激活血小板形成血小板微粒,随着激活剂浓度的增加,CD62p~+PMP、PAC-1~+PMP的百分率都逐渐增加,经t检验统计分析,同一诱导剂各浓度间有显著性差异(P<0.01),但同一浓度的同一诱导剂作用的血小板 流式细胞术研究血d伍 膜蛋白一中文摘要 栋①泣的CD62P、PAC{表达无显著性差异。②冠·C病组、高血压病 人组 CD62p”PMP的百分率(85.1%t 3.7%、86.% t 5.8%)》正常对 照组门.5%24.4们高,冠心病组、高血压病人组PAC习PMP的 百分率(“.9卜3.8%、86.儡t 5.7%)也比正常对照组(76.3%t 5.3%)高,经 t检验有显著性差异,均有p叩.001,而冠。c病组 和高血压组间无显著性差异。另外,同一组中,CD6切TMP和*C- 1+PW的百分率无显著性差异。③服药前、服药后4 d、服药后5 d、 服药 6d、停药后 3d、停药后 4d CD62P”PMP的百分率分0为 84.3% 土3.6%、8二.4%上3.4%、7o.3%上2.7%、70.6%上3.2%、83.5%上2.8%、 85.4%tZ.l%,PAC一1“PMP的百分率分另为 85.3%t3.5%、82.5%t 2.2%、72.3%士3.5%、72.4%土3.3%、85.4土3.4%、86.0土3.8%。服 药后 4d CD62P”P皿、PAC-1”P删的百分率有所降低,但 t检验无显 著性;服药后sd显著性降低门叩.0皿),停药后3d基本恢复。同 一时间点,CD6切TMP、PAC叶TMP的百分率无显著性差异。 结论:①不同刺激强度的血小板诱导剂,随着其浓度的增加, 其诱导血小板所形成的CDQPTffe、PAC叶”PMP的百分率驹增加。 @冠心病、高血压与血小板做膜上的 CD6切、PAC刁表达有一定 的联系。③在冠。C病病人服用抵克利得这一抗血小板药物的的不同 时相,血,1、板敝膜上的CD6切、PAC丑表达呈现一定规律的变化。 ④检测血小板肋膜蛋白有助于心血管疾病的诊断和触小板药物 疗效观察。
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