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啤酒大麦的品种和质量与麦芽的制作和啤酒的酿造紧密相关,其品质优劣是决定啤酒质量的关键,需要开发一种快速、定量化的大麦品种鉴定方法。本研究探讨了蛋白质组学和实时定量PCR(q RT-PCR)技术在啤酒大麦品种鉴定和纯度检测中的应用。醇溶蛋白是啤酒大麦的品种标记物,根据大麦种子中各组分蛋白质溶解性质的不同分级提取醇溶蛋白。本研究以7种澳大利亚啤酒大麦(Gairdner、Baudin、Hindmarsh、Vlamingh、FAQ、Schooner和Commander)和4种国产啤酒大麦(苏啤3号和6号、垦啤7号和10号)为研究对象,利用双向电泳技术建立了各品种大麦醇溶蛋白双向电泳图谱,构成了这11种啤酒大麦醇溶蛋白标准图谱库。各品种醇溶蛋白点在图谱上分布形状和位置有明显不同,且进口澳麦与国产啤麦醇溶蛋白图谱间差异明显,通过图谱间的差异可初步区分澳麦和国产啤酒大麦。通过PDQuest图像分析软件,对获得的澳麦醇溶蛋白图谱进行了比对分析,检测到43个共同蛋白点和18个特异蛋白点,通过串联质谱飞行鉴定技术(MALDI-TOF/TOF)成功鉴定出34个共同蛋白点和13个特异蛋白点,这些鉴定成功的蛋白点构成了这7个品种澳麦的蛋白标志物库。34个共同蛋白点大部分鉴定为大麦B组、C组和D组醇溶蛋白,或为醇溶蛋白前体物,另外一部分蛋白点鉴定为α-淀粉酶抑制剂和胰蛋白酶抑制剂家族,这类蛋白属于溶于氯仿/甲醇的醇溶蛋白;此外,还有少量鉴定出的假定蛋白和未知蛋白。鉴定得到的特异蛋白中,Gairdner大麦的特异蛋白(或标志蛋白)为醇溶蛋白B(Hordein B)、α-淀粉酶/胰蛋白酶抑制剂CM 16(α-amylase/trypsin inhibitor CM 16)和α-淀粉酶抑制剂BMAI-1(α-amylase inhibitor BMAI-1),Baudin的特异蛋白为B3-醇溶蛋白(B3-hordein)和B1-醇溶蛋白(B1-hordein),Vlamingh的特异蛋白为α-淀粉酶/胰蛋白酶抑制剂CMa(α-amylase/trypsin inhibitor CMa)、籽粒硬度吲哚蛋白A-1(hordoindoline A-1)和CMd前蛋白(AA-14-146)(CMd preprotein),Schooner的特异蛋白鉴定为BTI-CMe 2.2蛋白和α-淀粉酶抑制剂BDAI-1(α-amylase inhibitor BDAI-1)。通过人工混种实试验,利用q RT-PCR技术得到了Gairdner纯度与其标志蛋白α-淀粉酶抑制剂BMAI-1(IAMI)相对表达量的线性关系。进一步设计双盲实验,对未知纯度的样品,分别通过传统的聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳和q RT-PCR技术进行纯度鉴定,比较了两种方法的灵敏度和准确性,两种实验方法得到的鉴定结果一致。研究结果表明,利用蛋白质组学技术可以获得不同品种啤酒大麦醇溶蛋白双向电泳图谱库和各品种的标志蛋白,结合q RT-PCR技术对品种标志蛋白进行验证,从而达到对大麦品种的鉴定和纯度的检测,表明该方法的有效性和适用性。