油藏中反硝化产气菌筛选及其在油水中产气性能研究

来源 :曲阜师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ciweiqiu
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油田微生物强化采油主要是指在水驱基础上利用微生物菌体、代谢过程及其代谢产物作用于油藏储层和原油实现原油采收率提高的方法。微生物采油机制主要包括:对原油的降解作用;菌体和产生的多糖类物质对油藏非均质储层的选择性封堵作用;产生的表面活性剂、酸和气等代谢产物的洗油和驱油作用。其中,产气微生物(尤其是反硝化产气菌)驱油方面的研究相对较少。立足于产气微生物驱油和抑制油藏硫酸盐还原菌生长代谢两个目标,本文以油藏反硝化产气菌为研究对象,开展以下三个方面研究:(1)从油藏产出液中分离高效反硝化产气菌;(2)探究反硝化产气菌生长产气的最佳条件;(3)探究添加到油水样中的反硝化产气菌在油水样的连续稀释作用下的产气效果及其丢失情况。(1)油藏反硝化产气菌的筛选鉴定分离反硝化产气菌所用油水样取自实施过微生物采油的油藏区块,即,曾长期向油藏储层注入硝酸盐溶液开展过微生物采油矿场实验,硝酸盐还原菌是这些油藏区块的优势微生物类群。经富集、分离、纯化和16S r RNA基因序列分析,共分离到8株具有明显产气效果的反硝化产气菌:Y23和NCBI数据库中的Pseudomonas stutzeri N2菌株16S r RNA基因序列相似性达到99.50%,产气量310m L/L;PJ5和Achromobacter denitrificans RT10-2菌株的16S r RNA基因同源性达到了99.79%,产气量115 m L/L;G21与Acidovorax temperans LS4-1有99.00%的序列相似性,产气量256 m L/L;J21与多株Thauera sp.菌株的16S r RNA基因同源性均达到了99.00%以上,产气量184 m L/L;K11与Rhizobium pusense strain有较高的同源性,产气量46 m L/L;K22与Ochrobactrum pseudogrignonense相似度达到99.85%,产气量99 m L/L;K1属于Klebsiella pneumoniae,产气量74m L/L;通过基因序列分析确定QFP为Pseudomonas aeruginosa,产气量195 m L/L。(2)营养组分及环境因子对反硝化产气菌生长产气的影响菌株Y23以工业上常用的糖类(葡萄糖、蔗糖、糖蜜)、小分子有机酸类(乙酸钠、丁二酸钠)、和小分子醇(甘油)为唯一碳源时均能进行反硝化产气,其中糖类是其反硝化产气的最佳碳源,以糖类为唯一碳源时每升培养液产气量达255 m L以上。碳源添加量10000 mg/L,氮源添加量2000 mg/L产气量达到最大1075 m L/L。Y23在16-56℃的温度范围中均具有产气能力,产气的最适温度范围30-37℃。在p H为6.0-9.0范围中均具有产气能力,产气的最适p H为7.0-8.0。(3)菌株Y23在油水样中的生长和产气性能将Y23添加到油水样中,经培养后按一定百分比接种到新的油水样,按上述方法再次进行传代培养,探究在油水样连续稀释下Y23的产气效果及丢失情况。结果表明:接种1%菌株Y23的油水样中产气量远远高于对照组,分别为292m L/L和82 m L/L;经多次传代稀释后,含有菌株Y23的油水样产气量仍高出对照组91 m L/L。菌群16S r RNA高通量测序分析表明,经油水样连续稀释后,含有菌株Y23的油水样中假单胞菌属相对含量显著高于对照组。以上数据表明,Y23能够在在油水样中生长代谢产气,具备一定的抗稀释性。综上所述,本文围绕反硝化产气菌在油田生产中的应用,筛选获得一株高效反硝化产气菌Y23,明确了该菌株产气的最佳营养组分和环境条件,并证实了菌株Y23能够在油水样中生长产气,且具备一定的抗稀释性。本文研究可为反硝化产气菌在油田生产中的应用提供理论依据。
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