海水浮游病毒提取技术及其荧光显微计数方法

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海洋中病毒含量极其丰富,多种多样,是海洋中最普通的生物群体,是海洋生物化学循环中最大的一环,在微生物食物环中有着重要的生态学意义,可以影响许多生物地球化学过程和生态学过程,海洋病毒能够侵染多种海洋生物,是海洋中最主要的致命体,几乎对所有的海洋生物都有所影响,众所周知,由病毒引起的病毒性传染疾病,给世界水产养殖业带来巨大危害和损失,是水产养殖业发展中急待解决的一大难题。 尽管如此,直到近几年,人们对海洋病毒的认识仍然大大落后于其实际存在。近十年来,随着技术的不断进步,Bergh et al.(1989)、Suttle et al.(1990)、Fuhrman(1999)、Kirchman(1999)和Mann et al.(2003)等陆续在Nature上发表了多篇有关海洋病毒生态作用的报告,人们才逐渐意识到海洋病毒的生态意义。 因此,开展对海洋游离病毒的基础性研究,对不同海域的病毒进行分离,建立我国不同海域的病毒分离物资源保存库和病毒基因库,将对海洋病毒生态学及流行病学研究提供前提,对海洋生态动力学的学科创新、海水养殖业病毒害防治和海水病毒的快速检测鉴定具有重要意义。 本论文在农业部海水养殖生物疾病控制与分子病理学实验室开放课题资助下,对海水中浮游病毒的存在及分布进行了研究,初步建立了高效、快速、高通量提取纯化海洋病毒的方法,对青岛及附近海区的海水中浮游病毒做了荧光显微计数定量,对浓缩分离后的病毒做了基因文库构建的初步研究。 为了从海水中提取纯化病毒,本文对吸附洗脱法、化学絮凝法等浓缩方法进行了探索和尝试,最后利用三氯化铝沉淀病毒,同时加入滑石粉-硅藻土作为病毒吸附剂促进病毒吸附沉淀的方法,初步建立起了一种可以通过处理大体积海水浓
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