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目的宫颈癌是严重危害女性健康的第二大恶性肿瘤,高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)的感染是其主要危险因素,但并非唯一因素。研究发现,叶酸缺乏与DNA甲基化状态均与宫颈癌的发生有关,且两者之间也存在密切联系,而抑癌基因CpG岛异常甲基化是导致其自身转录失活的重要机制,但叶酸缺乏与抑癌基因的表达在宫颈癌变中的关系,目前尚不清楚。本研究旨在探索叶酸与抑癌基因P16、FHIT的表达在宫颈癌变中的关系,为宫颈癌发病机制的研究提供理论依据。方法选取2009年至2011年期间在山西医科大学第二附属医院、山西省肿瘤医院、太原市妇幼保健院和介休市妇幼保健院就诊的低度宫颈上皮内瘤样变(CIN1)患者55例,高度宫颈上皮内瘤样变(CIN2/3)患者55例,宫颈鳞状细胞癌(SCC)患者64例和同期在同一医院妇科就诊的宫颈炎症(CI)患者80例为研究对象。调查研究对象的人口学特征、生活习惯以及生殖情况,并采集宫颈组织标本和清晨空腹静脉血。采用多重PCR法检测HR-HPV16感染状况,微生物法测定血清叶酸及红细胞叶酸水平,应用MSP技术,real-time PCR和Western-blot法分别检测抑癌基因P16、FHIT启动子区CpG岛甲基化状态及其mRNA和蛋白表达水平。采用SPSS17.0进行各组观察指标的相关分析,服从正态分布且方差齐性资料采用ANOVA,方差不齐采用Welch检验；定性资料采用x2检验、趋势x2分析,两变量间的相关采用pearson及spearman秩相关分析,应用单因素及多因素非条件Logi stic回归进行相关因素分析,通过计算比值比0R值及其95%CI评价疾病与因素间的关联强度,采用相加模式及交互作用指标RERI、AP、S进行交互作用定性和定量评估。结果(1)HPV16的感染率在CINl组(41.8%)、CIN2/3组(56.4%)及SCC组(64.1%)均高于CI组(17.5%)。随着宫颈病变的加重,HPV16的感染率呈升高趋势(x。趋势=34.96,P<0.001)。不同宫颈病变组研究对象的HPV16E6及E7mRNA表达水平不全相同,差异有统计学意义(F=8.717,P<0.001；F=13.528,P<0.001)。CI组HPV16E6及E7mRA的表达水平最低,SCC组最高。经LSD-t检验两两比较,除未发现HPV16E6及E7mRNA表达量在CIN1组与CIN2/3组之间有差异外,其余任意两组间均有统计学差异(P<0.05)。(2)血清与红细胞叶酸含量在四组中的总体分布不尽一致(H=59.08,P<0.001；H=43.68,P<0.001)。随宫颈病变程度的加重,血清叶酸与红细胞叶酸含量均呈下降趋势。Bonferroni祛两两比较得,除CI组与CIN1组,CIN2/3组与SCC组之间差异无统计学意义外,其余四组两两间血清叶酸含量均有统计学差别(P<0.0083)；红细胞叶酸水平在CI组与CIN2/3组、SCC组以及CIN1组与SCC组间差异有统计学意义(P<0.0083)。血清叶酸与红细胞叶酸间存在正相关(rs=0.405,P<0.001)。(3)在CI组,CIN1组,CIN2/3组和SCC组,P16基因甲基化率依次为1.3%,12.7%,18.2%和29.7%。随着宫颈病变的进展,呈逐渐升高趋势(x2趋势=23.46,P<0.001)。不同宫颈病变组P16mRNA及蛋白表达量总体分布差异有统计学意义(F=10.628,P<0.001；F=86.944,P<0.001),由CI组到SCC组,P16mRNA及蛋白表达量均逐渐升高。CIN2/3组及SCC组P16mRNA表达水平较CI组高,且SCC组高于CIN1组；CINl组、CIN2/3组及SCC组P16蛋白表达水平均高于CI组,CIN2/3组及SCC组亦高于CIN1组。叶酸水平与P16CpG岛甲基化及蛋白表达量间均存在负相关(rs=-0.145,P=0.021；rs=-0.126,P=0.045)。叶酸与P16CpG岛甲基化以及P16蛋白高表达在宫颈病变中存在正相加交互效应。HPV16E7mRNA与P16mRNA表达量之间存在正相关(r=0.383,P<0.001)。(4)在CI组,CINl组,CIN2／3组和SCC组,抑癌基因FHIT甲基化率依次为5.0%,16.4%,25.5%和40.6%。随着宫颈病变的进展,表现出升高趋势(x2趋势=28.34,P<0.001),不同宫颈病变组FHITmRNA及蛋白表达量总体分布差异有统计学意义(F=19.676,P<0.001；F=18.656,P<0.001),由CI组到SCC组,FHITmRNA及蛋白表达量均逐渐降低。CIN1组、CIN2/3组及SCC组FHITmRNA及蛋白表达水平均较C工组低,且SCC组均低于CIN1组。叶酸水平与FHITCpG岛甲基化间存在负相关关系(rs=-0.127,P=0.041),叶酸水平与FHIT蛋白表达量间存在正相关关系(rs=0.134,P=0.033)。红细胞叶酸与FHIT基因CpG岛甲基化以及FHIT蛋白低表达在宫颈病变中存在正相加交互效应。(5)多因素Logistic回归分析显示,宫颈病变的危险因素在CIN1组有产次多、P16蛋白高表达和FHIT蛋白低表达；CIN2/3组有HPV16感染、职业为农民、洗阴频率少、产次多、血清叶酸及红细胞叶酸缺乏、P16mRNA高表达、P16蛋白高表达和FHIT蛋白低表达；SCC组有HPV16感染、职业为农民、洗阴频率少、孕次多、产次多、血清叶酸和红细胞叶酸缺乏、P16mRNA及蛋白高表达、P16/FHITCpG岛甲基化、FHITmRNA及蛋白低表达。结论(1)血清叶酸与红细胞叶酸缺乏均可导致宫颈癌的发生风险增加：血清叶酸与红细胞叶酸水平均随着宫颈病变程度的加重而降低,且两者间存在相关关系,机体叶酸低水平与HPV16感染在宫颈病变中可能存在协同作用。(2)抑癌基因P16CpG岛甲基化率及其mRNA和蛋白表达增加可导致宫颈癌的发生风险升高：P16CpG岛甲基化率、mRNA和蛋白表达水平均随着宫颈病变程度的加重而增加,P16的异常高表达可能与HPV16E7的表达有关,红细胞叶酸缺乏与P16基因CpG岛甲基化及P16蛋白高表达间存在协同作用。(3)抑癌基因FHITCpG岛甲基化率升高及其mRNA和蛋白表达降低可能导致宫颈癌的发生风险升高：FHIT基因DNA甲基化率随着宫颈病变程度的加重而升高,其mRNA和蛋白表达水平均随着宫颈病变程度的加重而降低。红细胞叶酸缺乏与FHIT蛋白低表达间存在协同作用,提示FHIT蛋白的低表达可能与机体叶酸缺乏有关。(4)本次研究显示,HPV16感染、洗阴频率低、多孕、多产是导致宫颈癌的危险因素,职业、文化程度等可用以反映研究对象社会地位的指标与宫颈癌的发生亦密切相关。