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相思子毒素(abrin),类似于蓖麻毒素(ricin),是一种植物蛋白毒素,具有极强的细胞毒性作用,也是一种对公共安全存在潜在威胁的生物恐怖剂,因此,发展和建立特异、灵敏的检测相思子毒素方法是十分急需、重要的。本文经对相思子毒素的传统提取纯化方法的优化、改进,建立了相思子毒素新的提纯制备技术,获取的天然毒素作为建立相应检测方法的参考物质。利用大肠杆菌表达的重组相思子毒素A链蛋白制备了2种动物来源的多克隆抗体,建立了基于胶体金免疫层析、双抗体夹心生物素-亲和素ELISA的相思子毒素快速、特异和灵敏的检测鉴定方法。首先,根据相思子毒素对半乳糖的特异性结合能力,采用亲和层析技术将相思子种子中大部分杂质除去;由于在植物种子中蛋白毒素总是与凝集素并存,根据二者分子量的差异进行了凝胶过滤层析,去除凝集素,最终获得天然相思子毒素纯品,电泳纯度为98%。然后,利用大肠杆菌表达重组相思子毒素A链蛋白,经金属螯合层析法纯化后,将重组相思子毒素A链蛋白抗原免疫大耳白兔、昆明小鼠,分别采集、纯化兔血清多抗和鼠腹水多抗。接着利用兔抗重组相思子毒素A链和鼠抗重组相思了毒素A链多克隆抗体,结合标记技术,分别建立基于双抗体夹心法的胶体金免疫层析检测卡和基于生物素-亲和素ELISA的定量检测相思子毒素方法。胶体金与ELISA法的检测灵敏度分别达到600ng/mL、0.06ng/mL;线性范围分别为:30ng/mL～600 ng/mL、0.06ng/mL～60ng/mL回收率分别80%～110%,66.7%～133%;变异系数均小于10%。最后,采用动物血清及几种常见食品模拟环境样品,蓖麻毒素及其他常见毒素评价显示两法特异性良好,模拟环境试验的样品检测敏感性相同。