哮喘患者支气管肺泡灌洗液中肥大细胞功能特性的研究

来源 :中国医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:asd2303690
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
前言 支气管哮喘(哮喘)是一种常见病、多发病,对人类危害极大。该病影响着大约10%的世界人口,在不同的国家或地区其发病率不同。哮喘的发病可能是多个基因与环境因素相互作用的结果。其比较成熟的关于发病机制的理论仍为Ⅰ型变态反应学说,而IgE依赖性肥大细胞激活是该理论的核心,也正是本文的研究内容。 与非哮喘者相比,哮喘患者支气管肺泡灌洗液(BALF)中肥大细胞的数量增多、肥大细胞分泌的组胺和类胰蛋白酶的水平增高。这些现象与气流阻塞程度呈现的正相关,提示肥大细胞激活是哮喘发病机制中关键的一步。这一点也被光镜和电镜下所见到的哮喘患者局部抗原激发后BALF中的肥大细胞脱颗粒现象所证实。 然而,人们对于哮喘患者BALF中肥大细胞的功能特征却了解较少。由于直接观察哮喘患者BALF中的肥大细胞对理解哮喘时气道中肥大细胞的作用有极大的意义,故本实验对哮喘患者BALF中肥大细胞的功能特征进行了研究。 实验材料和方法 一、实验材料:茶碱、腺苷(9-β-D-Ribofuranosyladenine)、腺苷衍生物(NECA:5′-N-ethylcarboxamidoadenosine)、离子载体钙A23187(CI)、Ⅰ型胶原酶、Ⅰ型透明质酸酶、青霉素和链霉素、牛血清白蛋白、含25mM HEPES的MEM、绵羊抗鼠免疫球蛋白、extr-抗生物素蛋白过氧化物酶和o-苯二胺(OPD)均由Sigma公司购得,山羊抗人IgE抗体、组胺酶联免疫试剂盒购于Serotec公司(Kidlington,Oxford,UK)。 二、实验方法 1.同意行支气管肺泡灌洗液检查的29名稳定期轻度支气管哮喘患者参与了本研究。 2.BALF肥大细胞激发试验:将经Olympus BF光学纤维支气管镜回收的BALF用消毒过的尼龙滤器过滤,并用含2%小牛血清的缓冲液冲洗两次。在取出10gi进行细胞计数后,剩下的细胞再重新悬浮于含钙、镁离子缓冲液中。激发过程在 LP。试管中完成,即在预先加完 50 gi抗 IgE抗体、CI、腺着、腺昔衍生物州ECAX缓冲液或抗 IgE抗体十腺耷、抗 IgE抗体十茶碱、腺着十茶碱的试管中分别加人100gi细胞悬液,并在37叱水浴箱中培养20分钟。激发反应由向置于冰上的试管中立即加人100gi冷缓冲液,并立即离心而终止。上清液与细胞分离后于一20℃冻存。 3.BALF肥大细胞组胺测定:采用组胺酶联免疫反应试剂盒来检测。其检测方法以100gi的标准品、对照品或标本与50gi的酸化溶液混匀后,在室温下反应豆小时。取 50 pl化后的标准品、对照品或标本加人到已包被过抗体的96孔盘内,再于每孔内加入200gi酶标物并在4吃条件下培养18 /J’时。洗俄加 200gi底物显色,然后用酶标仪Li 410inn光波长读盘。 4.组织中肥大细胞的分离和激活:手术切除的经病理证实大体正常的肺或大肠组织切成小块放人含互型胶原酶和1型透明质酸酶的消化液中在37叮摇动水浴箱中分别培养60分钟和70分钟。悬浮的细胞通过滤过器p径二皿pM)与未消化的组织碎片分离,然后放人含10%小牛血清的培养液中于室温下培养伤小时。悬浮的细胞经不含钙、镁离子的缓冲液冲洗两次后,再重新悬浮于缓冲液中。激发过程在LP试管中完成,即在预先加完50则抗 IgE抗体人I或缓冲液的试管中加人 100gi细胞悬液,并在37吃水浴箱中培养 20分钟。激发反应由向置于冰上的试管中立即加人 150gi冷缓冲液,并立即离心而终止。上清液与细胞分离后于一20六冻存。 5.组织中肥大细胞的组胺测定:用以玻璃纤维为基础的荧光方法测定细胞悬液中的组胺水平。 6.类胰蛋白酶水平测定:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)的方法以抗类胰蛋白酶血清为二抗进行铺盘,并置于 4℃条件下过夜。用 3%BSA阻断非特异性蛋白质结合位点后,加人类胰蛋白酶标准品或待测样品,每孔50 pl。以抗类胰蛋白酶单克隆抗体为识别 1抗使之与标准品或待测样品中的类胰蛋白酶结合,并以生物素结合的羊抗鼠免疫球蛋白为*抗与extr一抗生物素蛋白过氧化物酶结合。最后用。一苯二胺显色并用酶标仪以490urn光波长读盘。 7.统计学方法:全部统计分析均采用SPSS门础i*10.0)软件。数据以二士或M来表示。P<0刀5为统计学上有显著差异。 ·2· 结 果 乙在哮喘患者 BALF中,加人抗 IgE抗体浓度低至 0.of%时即可诱导哮喘患者 BALF中肥大细胞释放 ZI.1%的组胺,而非哮喘着肺和大肠中·1%的抗IgE抗体浓度仅诱导18.5%和16.9%的组胺。将抗除抗体浓度从0.of%增加到3%对哮喘患者BALF’中肥大细胞的组胺释放量无明显影*。 本实验抗IgE抗体对哮喘和非哮喘患者肥大细胞分泌组胺影响的敏感性截然不同,与之相对应本实验哮喘患者BALF中的肥大细胞对CI刺激的反应与非哮喘者肺和肠的反应相似,例如 lopol/L浓度的 CI可分别引起40.0%乃6.8%及39·8%的组胺释放。腺耷浓度达100opOUL时仍无明显刺激组胺释放的作用,仅在浓度高达1000pmoUL时方可诱导哮喘患者BALF中肥大细胞释放约17%的组胺。NE
其他文献
相对于意大利北部发达的工业文明,充满匠气的南部似乎更适合滋养传统文化和工艺。而萨雷诺就是这样一个在新时代玩转传统产业的地方。"萨雷诺窗户外的夜色造就了一幅绝世名画,
近些年来,在国家大力倡导“节能减排”能源利用政策的大环境下,将工业烟气废水余热回收利用,不仅可以实现节能减排、提高能源利用率、降低生产成本、保护环境,而且还能给工业企业
大疆的航拍无人机,占据了全球民用小型无人机70%的份额。在市场上,创始人汪滔是一个狠角色。2013年年底,贾晓婷(化名)到深圳大疆创新科技有限公司(下称“大疆”或“DJI”)的电商部门
通过对比国内与进口零食的致敏原标示情况,了解我国致敏原标识现状与存在问题。方法:采用预包装食品营养标签调查法获取上海8所大型超市食品营养标签初始信息,利用SPSS 20.0进
微信作为一种新兴的网络传播媒介,凭借自身信息发布便捷、传播速度快、互动性强、活跃度高以及成本低等媒介优势,迅速成为高职院校文化育人新阵地。以校园微信为载体,挖掘校园微
由于明光市农村公路交通量不断增大,车辆荷载大幅度增加,使早期修建的部分桥梁发生了不同程度的破损,影响了公路的通行能力,制约了地方经济的发展.文章结合我市十二五农村公
本文仅将作者对翻译实践与翻译研究的认识呈现给对翻译感性趣的同仁。从翻译的历史可以见得,翻译实践活动作为文化交流的桥梁在中国有史可鉴。经东西方数代人的努力,跨文化翻
回 回 产卜爹仇贱回——回 日E回。”。回祖 一回“。回干 肉果幻中 N_。NH lP7-ewwe--一”$ MN。W;- __._——————》 砧叫]们羽 制作:陈恬’#陈川个美食 Back to yield
目的:探讨提高婴儿股静脉采血一次成功率的方法。方法:对200例婴儿随机分成2组,采用2种不同的方法进行采血,试验组采用斜角穿刺法采血,对照组采用传统的垂直穿刺法采血。结果:斜
雷军的一句“站在风口上,猪都能飞”,犹如一针兴奋剂驱动着新兴创业者在互联网领域寻找着属于自己的机会,依托着移动互联网,小米开创出“订单式”电子商务模式:通过“按需定制”,小