【摘 要】
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随着人们生活水平的提高,对肉类、蛋类以及奶产品安全性的关注日益高涨,寻找安全有效的抗生素替代品作为绿色饲料添加剂的必要性愈发迫切。本研究以秃疮花(DLF)为主要原料,对其作为绿色饲料添加剂的应用前景进行了探索。首先,使用控制变量法,设置梯度试验,从而对DLF中生物碱的提取工艺进行优化。随后,采用实验所得的最佳工艺对不同器官中异紫堇碱(ICD)含量进行比较。其次,以DLF为主要材料配合其它中药分别设
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随着人们生活水平的提高,对肉类、蛋类以及奶产品安全性的关注日益高涨,寻找安全有效的抗生素替代品作为绿色饲料添加剂的必要性愈发迫切。本研究以秃疮花(DLF)为主要原料,对其作为绿色饲料添加剂的应用前景进行了探索。首先,使用控制变量法,设置梯度试验,从而对DLF中生物碱的提取工艺进行优化。随后,采用实验所得的最佳工艺对不同器官中异紫堇碱(ICD)含量进行比较。其次,以DLF为主要材料配合其它中药分别设计了绿色添加剂多种配方,检测了他们对鸡和鲤鱼生长性能和健康的效应。从非特异免疫因子和抗氧化指标的变化以及对多种组织的转录组水平的效应和肠道菌群的影响等方面,对其可能的机理进行了探究。结果如下:1、ICD提取最佳条件为:在p H=3的65%乙醇溶液中,料液比1:13,70℃恒温水浴加热4h。在最佳工艺条件下,比较了不同器官中ICD的含量,得出花苞>花>根>全草>果荚>种子。2、DLF对动物生长指标的影响效果:C1组能使鸡的料重比显著降低,有较好的促生长作用。L2组能促进鲤鱼的生长,并且饵料系数能得到有效的降低。3、DLF能够显著提高动物非特异性免疫因子的含量或基因表达水平(1)DLF对鸡非特异性免疫指标和抗氧化指标的影响DLF可以使血清中的ACP、AKP和LZM活力得到增加。DLF可以使肝,脾,肾和法氏囊中的AKP活力得到显著升高,但是可以显著降低各组织中的LZM含量。而且,仅C3组能够使各组织中的ACP和SOD活力得到显著升高。除此之外,在肝和法氏囊中,MDA含量能够得到显著降低,但在脾和肾中无明显改变。C2组能使肝,脾,肾和法氏囊中的GPT活力得到显著升高。DLF可以显著降低鸡的肾和法氏囊中IFN-γ、IL-1β、TNF-ɑ、CYP1A1和GST的表达。而在肝和脾中,DLF可以使IFN-γ、TNF-ɑ、CYP1A1和GST的表达达到显著增加水平。(2)DLF对鲤鱼非特异性免疫指标和抗氧化指标的影响L1处理组可显著增加鲤鱼肝、肠和鳃的ACP、AKP、LZM和SOD活力。L2处理组可以使肝,肠和鳃中的MDA活力在14天时显著降低。L1处理组能使肝脏中的GPT活力在14天时得到显著降低。并且,三个处理组均能使肠和鳃中的GPT活力得到显著降低。DLF可以使肠和鳃中的IL-1β和GSTa表达水平在14天时得到显著增加。L2组可以使IFN-γ和TNF-ɑ在肠组织中的表达达到显著增加水平。并且,在14天时DLF能够降低肝组织中IFN-γ、IL-1β、TNF-ɑ和GSTa表达水平。DLF可以在7天时显著降低肝组织中CYP1A表达水平,而在14天时可以使肠组织中CYP1A表达水平得到显著降低。4、DLF对鸡和鲤鱼多个组织的转录组产生显著的影响(1)通过分析DEGs发现,其中包含了许多关于生长、免疫及抗氧化的基因。比如IGFBP4、GDF7、EMP1、IGFBP1、LTBP1、BLB2、IL8L2、TLR2A、TLR3、IL2RA、IL1R2、IGLL1、STAT1、STAT2、GSTA3、CYP1A2、TGFB2、TGFBR2、LILRA3、IL34、CYP1A1等。DEGs的GO富集分析发现多个与生长、免疫和抗氧化相关的GO terms得到显著富集。比如,增长调节、胰岛素样生长因子受体信号通路的调控、适应性免疫应答、T细胞介导的免疫、抗氧化活性、对氧化应激的反应等。(2)DEGs的KEGG富集分析发现多个与生长、免疫和抗氧化相关的信号通路得到显著富集。比如,转化生长因子β信号通路、雷帕霉素靶蛋白信号通路、Toll样受体信号通路、核苷酸结合寡聚化结构域样受体信号通路、肠道Ig A产生的免疫网络通路、细胞色素P450代谢外源性物质等。5、DLF对鲤鱼肠道菌群的影响:DLF可以显著降低有害菌群相对丰度而增加有益菌群的相对丰度,并且能够促使细菌的多样性得到增加。以上实验结果表明,DLF的合理使用对促进生长、提高饲料利用率、保持动物健康具有良好的作用,其基本的机理在于DLF可以增加生长和免疫相关基因的表达水平。这些结果为其在养殖业绿色饲料的开发应用中提供了参考数据和理论基础。
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