重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗研究及应用

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H5和H7亚型高致病性禽流感病毒(Highly pathogenic avian influenza virus,HPAIV)通常可导致感染家禽全部死亡,引起疫情的暴发。2003年以来,在全球60多个国家和地区暴发了H5亚型AI疫情。同时,H5和H7亚型AIV均能导致人发病和死亡,给人类健康带来严重威胁。疫苗免疫是适合我国国情的AI最有效防控措施之一。2014年以来,我国家禽中分离的H5亚型AIV主要属于2.3.4.4分支,国家禽流感参考实验室研制的H5N1亚型Re-8株系列灭活疫苗,已在家禽中广泛应用并取得了良好的效果。2017年初,我国人H7N9流感疫情增多,家禽中出现H7N9亚型HPAI疫情,迫切需要能够同时预防H5和H7亚型AI的禽AI疫苗。本研究首先对H7N9 H7-Re1疫苗株的病毒含量、毒力、免疫原性等生物学特性进行了系统鉴定。结果显示,该疫苗种毒生物安全度高、特异性强、免疫原性好且能在鸡胚中高效稳定增殖,是用于H7亚型HPAI防控的理想疫苗种毒。其次,以H5N1 Re-8株和H7N9 H7-Re1株疫苗种毒为基础,研制出重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)(以下简称H5+H7二价灭活疫苗),进行了安全性和有效性的系统评估。将H5N1 Re-8株和H7N9 H7-Re1株鸡胚尿囊液分别2倍浓缩,使用甲醛灭活后,按照本研究确定的1:1.5抗原比例乳化制备成H5+H7二价灭活疫苗。安全性试验结果表明,大剂量、单剂量和单剂量重复接种的SPF鸡在接种后14日内,无任何不良反应。该疫苗最小免疫剂量为0.1mL,免疫后3w H5和H7亚型HI抗体平均滴度均在6log2以上;肌肉与颈部皮下途径免疫SPF鸡,效力无明显差异,均可产生较高的抗体水平,高峰期(首免后4w)抗体水平即可达9log2,SPF鸡肌肉注射免疫后14d到210d均可获得完全保护;抗体与攻毒保护结果表明,免疫后3w H5和H7亚型HI抗体滴度达到3log2时可以获得抗死亡保护,达到4log2及以上时可获得完全保护。最后,将H5+H7二价灭活疫苗免疫商品蛋鸡、商品白羽肉鸡、商品黄羽肉鸡、商品鹅以及商品肉鸭,进行田间试验。结果表明,该疫苗具有良好的安全性,免疫不同品种的家禽后均吸收良好,无局部或全身不良反应。该疫苗免疫蛋鸡后HI抗体可高达9log2左右(免疫后150d),免疫持续期达150d,按程序免疫后,抗体更高,持续期更长;商品白羽肉鸡经一次免疫、商品黄羽肉鸡和商品肉鸭经二次免疫,上市前均能获得完全免疫保护。商品蛋鸭和种鹅按程序免疫,免疫后能产生良好的抗体,均可以抵御H5和H7亚型AI高致病性禽流感病毒的攻击。本研究研制出H5+H7二价灭活疫苗,对鸡、鸭和鹅均具有良好的安全性和有效性。2017年9月,该疫苗开始在全国家禽中应用,已在预防家禽H5和H7亚型AI及成功阻断人感染H7N9病毒过程中发挥重要作用。
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