【摘 要】
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鸭瘟是由鸭瘟病毒(DPV)引起的禽类的一种急性、热性、败血性传染病。CRISPR-Cas9系统是一种基因编辑技术,CRISPR相关蛋白9能对目的基因片段进行准确切割。本研究以DPV的UL23
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鸭瘟是由鸭瘟病毒(DPV)引起的禽类的一种急性、热性、败血性传染病。CRISPR-Cas9系统是一种基因编辑技术,CRISPR相关蛋白9能对目的基因片段进行准确切割。本研究以DPV的UL23以及US10基因为靶点,通过特定引物分别扩增出UL23、US10的左右同源臂,利用PUC19-EGFP构建出重组质粒PUC19-UL23-EGFP和PUC19-US10-EGFP,采用PCR方法将其线性化为目的基因片段UL23(AB)-EGFP和US10(AB)-EGFP。进而设计合成UL23、US10的gRNA(单向RNA),利用PX-330质粒分别构建出PX-330 Cas/gRNA(PX330-UL23-Cas9/gRNA质粒、PX330-US10-Cas9/gRNA质粒)。随后分别将对应的将线性化的目的基因片段、以及PX-330 Cas/gRNA质粒共转染到鸡胚成纤维细胞。根据绿色荧光蛋白表达情况、细胞病变情况结合蚀斑纯化技术以及PCR方法最终拯救出缺失UL23、US10基因的重组鸭瘟病毒△UL23和△US10。实验结果为鸭瘟新型疫苗的研发奠定了良好的物质基础。
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