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目的:以天然骨膜(Naturalperiosteum,NP)为基本原料,脱去其中的细胞,在此基础上连接具有间充质干细胞归巢功能的多肽(SKPPGTSS,SKP),构建连接有间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)归巢功能多肽的脱细胞骨膜(Decellularized periosteum-SKPPGTSS,DP-SKP),并研究该膜对骨缺损修复的性能。方法:首先麻醉后从家兔的胫骨处取得NP,然后经过反复冻融及物理、化学洗脱等步骤,除去NP含有的成骨细胞等细胞,从而得到脱细胞骨膜(Decellularized periosteum,DP)。通过碳二亚胺法于骨膜支架上连接SKP,反应得到DP-SKP。通过苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin,H&E)染色、马松(Masson)三色法染色、4,6-二脒基-2-苯基吲哚(4,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)染色、扫描电子显微镜(Scanning electron microscopy,SEM)观察、溶胀系数测定以及对胶原纤维和糖胺聚糖(Glycosaminoghycans,GAG)含量的检测分别对NP和DP进行表征及对比。体外细胞实验中使用兔骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),通过细胞活死染色和细胞计数试剂盒(Cell countingkit-8,CCK-8)对DP组、DP-SKP组和空白对照组(Control组)进行细胞相容性及细胞增殖的测定。通过测定碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活性、骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)免疫荧光染色和茜素红染色对各组成骨方面性能进行测试。体内动物实验中使用家兔颅骨缺损模型,通过CD29、CD90免疫荧光染色比较DP组和DP-SKP组体内对间充质干细胞的归巢作用;通过微型电子计算机断层扫描(Micro computed tomography,Micro-CT)数据分析,H&E染色、Masson三色法染色等来评价DP组、DP-SKP组和Control组在体内促进骨缺损修复的能力。结果:成功将NP脱去细胞制得DP以消除NP的免疫源性。DP保留天然骨膜的双层结构、胶原纤维及其他大部分细胞外基质。同时在DP上成功以肽键连接SKP制得DP-SKP。体外细胞实验中,DP-SKP组细胞活死染色中活细胞数量较其余组多且未见明显死细胞,CCK-8检测数值也高于其余组,表明其对兔BMSCs细胞相容性好,并且具有一定的促进增殖作用。在体外成骨性能测试中,DP-SKP组ALP活性,OPN染色强度,茜素红染色钙结节数量均高于其余组,表明其对成骨的良好促进作用。在家兔颅骨缺损模型中,DP-SKP组较DP组有更多的MSCs,表明了 DP-SKP对MSCs的归巢作用。且Micro-CT的骨缺损区域表面重建,骨组织和骨小梁的数据分析以及H&E染色、Masson三色法染色,DP-SKP组的新生骨组织数量和质量均高于其余组。这表明了 DP-SKP良好的促进骨缺损修复性能。结论:成功制备DP-SKP。在细胞实验中,DP-SKP具有良好的细胞相容性,并对细胞增殖有一定促进作用。且在整个体外成骨诱导分化过程中均起到促进作用。在体内动物实验中,在家兔体内对MSCs有着归巢的作用。并且对于兔颅骨缺损修复表现出较明显的促成骨性能。