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本文从营养学的角度研究硒对糖尿病大鼠的糖代谢、脂代谢及抗氧化系统、ATP酶、NO系统的影响,并探讨硒对糖尿病的营养疗效及其可能的机制,从而选择可行的疗效评价指标,为临床应用提供实验依据。
研究方法:选用健康雄性SD大鼠50只,体重165±10g,适应性喂养3天后,按体重随机抽取10只为正常对照组(NC),剩余的大鼠为造模组,所有大鼠禁食、不禁水12h以上,造模组大鼠一次性尾静脉注射1%链脲佐菌素(STZ)柠檬酸钠缓冲液(0.1mmol/L,pH=4.5,新鲜配制)50mg/kgbw,NC组给予相应容积的柠檬酸钠缓冲液。注射后恢复饮食。2周后禁食、不禁水12h,眼眶后静脉丛采血0.4~0.6ml测定空腹血糖,血糖值≥16.0mmol/L者为糖尿病大鼠模型,将糖尿病大鼠随机分为3组,每组9只(各组血糖的平均数的差值≤0.5mmol/L)。实验共四组:正常对照组(NC),糖尿病对照组(DM),糖尿病+低剂量硒组(DM+lowSe,补硒300μg/kgbw·d-1),糖尿病+高剂量硒组(DM+highSe,补硒450μg/kgbw·d-1),补硒量均在常备饲料(经本实验室测定饲料的硒含量0.070mg/kg)硒水平之上补予,以饮用补硒液的方式补硒,每周调整一次补硒液浓度。补硒10周,大鼠禁食、不禁水12h,腹腔注射10%水合氯醛(用生理盐水新鲜配制)4ml/kgbw麻醉大鼠,颈动脉取血,肝素抗凝,并及时离心,分离血浆,低温保存备用,冰浴下取心脏、肝脏、肾脏、胰腺和右后腿股二头肌.用冷生理盐水漂洗后滤纸吸干、称重,低温保存备用,部分肝脏和胰腺及时用10%甲醛固定用于做病理检验。及时测定血糖、糖化血清蛋白(GSP)、肝糖原、肌糖原、血浆胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)、丙二醛(MDA)、肾脏ATP酶、NO、一氧化氮合酶(NOS)、全血硒、肝硒等指标。
研究结果:
1.硒对血糖、糖化血清蛋白和糖原的影响治疗后糖尿病各组的血糖均比治疗前升高并有显著性差异(P<0.01),补硒后糖尿病低剂量补硒组的血糖(26.41±2.47mmol/L)和GSP(1.27±0.18mmol/L)均明显低于糖尿病对照组的血糖(33.47±2.60mmol/L)和GSP(1.59±0.14mmol/L)(P<0.01),糖尿病高剂量补硒组的血糖(31.29±2.88mmol/L)和GSP(1.50±0.19mmol/L)与糖尿病对照组的血糖和GSP没有显著性差异(P>0.05).
糖尿病对照组的肝糖原(6.01±1.04mg/g)明显高于正常对照组的肝糖原(2.95±0.34mg/g)(P<0.01),糖尿病低剂量补硒组的肝糖原(3.04±0.31mg/g)和高剂量补硒组的肝糖原(3.26±0.47mg/g)明显低于糖尿病对照组的肝糖原(P<0.01),且降到正常水平(P>0.05),肝脏的PAS染色也与肝糖原的的结果相一致;糖尿病对照组和正常对照组相比肌糖原的含量明显升高(P<0.01),两个补硒组和糖尿病对照组相比肌糖原的含量无显著性差异(P>0.05).
2.硒对血浆TC和TG的影响糖尿病对照组的血浆TC(1.37±0.06mmol/L)和TG(2.00±0.17mmol/L)明显高于正常对照组的TC(0.82±0.07mmol/L)和TG(0.26±0.05mmol/L)(P<0.01),糖尿病低剂量补硒组的TC(0.93±0.10mmol/L)、TG(0.88±0.11mmol/L)和高剂量补硒组的TC(1.08±0.12mmol/L)、TG(0.98±0.18mmol/L)含量与糖尿病对照组相比明显降低(P<0.01)。
3.补硒对体内的硒含量和肝、肾功能的影响糖尿病对照组的全血硒含量高于正常对照组水平(P<0.05),但两组间肝脏的硒含量没有显著性差异(P>0.05),两个补硒组的全血硒和肝脏的硒水平均明显高于糖尿病对照组的水平(P<0.01)。
糖尿病对照组的谷丙转氨酶(GPT)和肌酐(Cr)明显高于正常对照组的GPT和Cr(P<0.01),糖尿病低剂量补硒组的GPT和Cr低于糖尿病对照组水平(P<0.01),糖尿病高剂量补硒组的GPT明显高于糖尿病对照组的GPT(P<0.01)。另外肝功能的变化与肝脏的HE染色基本一致。
4.硒对谷胱甘肽过氧化物酶和丙二醛(MDA)的影响糖尿病对照组的全血GPX的活性(52.13±4.45U)和血浆MDA(2.93±0.31μmol/L)均高于正常对照组GPX(41.88±2.19U)和MDA(2.05±0.31μmol/L)(P<0.01),糖尿病低剂量补硒组的全血GPX(62.25±3.86U)明显高于糖尿病对照组(P<0.01),血浆MDA(2.03±0.43μmol/L)已降低到正常水平(P>0.05);而糖尿病高剂量补硒组的全血GPX(56.57±3.66U)也高于糖尿病对照组的GPX(P<0.05),血浆MDA(2.52±0.47μmol/L)低于糖尿病对照组MDA的(P<0.05),高于正常水平(P<0.05)。
5.硒对细胞膜ATP酶的影响肾脏Na+-K+-ATPase:糖尿病对照组的Na+-K+-ATPase活性明显低于正常对照组水平(P<0.01),两个补硒组与糖尿病对照组相比Na+-K+-ATPase的活性明显升高(P<0.01).
肾脏Ca2+-ATPase:糖尿病对照组的Ca2+-ATPase活性明显低于正常对照组水平(P<0.01),两个补硒组与糖尿病对照组相比的Ca2+-ATPase的活性明显升高(P<0.01),且与正常对照组的酶活性没有显著性差异(P>0.05)。
6.硒对NO系统的影响糖尿病对照组的血浆NO、NOS和诱导型(iNOS)均明显高于正常对照组的水平(P<0.01),糖尿病低剂量补硒组的血浆NO和iNOS均明显低于糖尿病对照组的水平(P<0.05),糖尿病低剂量补硒组和正常对照组相比血浆的NOS无显著性差异(P>0.05);糖尿病高剂量补硒组的血浆NO明显低于糖尿病对照组的NO水平(P<0.01)。
研究结论:
1.以STZ诱导的糖尿病大鼠模型血糖明显升高,并呈进行性加重,低剂量补硒能明显降低血糖,并且GSP的含量也表明硒控制血糖较平稳;长期糖尿病状态肝糖原和肌糖原升高,补硒后肝糖原明显降低,但肌糖原没有变化。
2.糖尿病发生后,血脂升高,补硒能明显降低血浆中TC和TG的含量。
3.糖尿病发生后,代表肝功能的GPT和肾功能的Cr在血浆中升高,低剂量补硒能明显降低GPT的活性和Cr的含量,从而改善肝肾功能。
4.补硒能提高全血GPX的活性,降低血浆MDA。从而提高机体的抗氧化能力。
5.补硒能提高糖尿病大鼠Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase的活性,减少细胞膜损伤。
6.长期糖尿病状态下,血浆NOS、iNOS活性升高,NO含量升高,低剂量补硒能明显降低血浆中三者的含量。
7.血糖、GSP、肝糖原、TC、TG、全血GPX、血浆iNOS、NO、Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase等可作为评价硒对糖尿病营养疗效的指标。