漆酶广泛存在于真菌、植物、昆虫与细菌中,是一种蓝色多铜氧化酶。漆酶具有广泛的底物特异性,可氧化多种酚类及非酚类芳香族化合物。细菌漆酶特性与真菌漆酶不同,它们可产生胞内或者胞外漆酶,并且它们在很宽的温度和p H范围内都能发挥活性。细菌漆酶可用于纸浆生物漂白、生物修复、纺织染料脱色、污染物降解和生物传感器等。因此,需要对包括来源、生产条件、克隆、表征和生物技术应用等综合信息进行分析比较,以便在工业水平上有效地了解和应用这些酶。本文从扭脱甲基杆菌Methylobacterium extorquens的基因组中扩增出漆酶Melac13220的基因,成功构建表达载体后在大肠杆菌中高活性表达,分子量约为50k Da,并通过离子交换层析对其进行了纯化,纯化后酶的纯度较高,可以直接用于随后的性质表征与应用研究。实验结果表明,当以ABTS为底物测定酶活时,酶的最适温度为75°C,但超过50°C时酶的稳定性较差,酶在40°C下稳定性最好,半衰期大约为50h,活力下降缓慢;45°C下半衰期大约为40h,活力下降较缓慢;50°C下半衰期为8.5h,活力下降较快。酶的最适p H为1.5,酸性条件下稳定性较好,1h后仍可以保留80%以上的活力。对底物ABTS的Km值为7.65×10-2m M,kcat值为14.6/s。Cu2+与Co2+可以轻度提高酶活,而Fe2+可使酶活提高25倍,可能是由于Fe2+影响到酶活中心处的Ⅰ类铜离子位点,不同的有机试剂会不同程度地降低酶活。在不加任何介体的情况下,该漆酶对刚果红的脱色效率较高,10h可达到脱色率90%以上;而对其他染料如靛蓝胭脂红脱色效率较低。本文主要对一种新型细菌漆酶的克隆、表达、纯化、表征与应用进行了初步研究,发现了此酶与其它漆酶的不同之处(如Fe2+对酶活影响),并对该酶的深入研究提供了实验基础,希望可以通过改变新酶特性使其可以在应用中发挥出更大的价值。