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【目的】本文观察硫代硫酸钠(STS)对血管平滑肌细胞(VSMC)核心结合因子α1(Cbfα1)、骨桥蛋白(OPN)及丝/苏氨酸蛋白激酶(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)分子的影响,旨在探讨STS抑制高磷诱导的VSMC钙化的作用机制。【方法】1.体外原代培养SD大鼠VSMC,倒置相差显微镜观察细胞形态及生长状态。α-SMA免疫组化鉴定细胞;3-6代细胞用于后续实验。2.将细胞随机分为两组:(1)正常磷组(1.3mmol/L);(2)高磷组(2.6mmol/L),干预7天后,观察细胞形态学变化,茜素红染色检测细胞钙盐沉积情况,邻甲苯酚络合酮比色法测定细胞钙含量;Real-time PCR检测骨化相关蛋白核心结合因子α1(Cbfα1)和骨桥蛋白(OPN)mRNA表达;Western Blot技术检测p-Akt(ser473)、p-mTOR(ser2448)、Cbfα1和OPN蛋白表达。3.检测到高磷组AKt/mTOR信号分子活化后,给予STS干预。VSMC分为:(1)高磷组(2.6mmol/L);(2)高磷+STS(0.5mmol/L);(3)高磷+STS(1.0mmol/L)(4)高磷+STS(2.0mmol/L);干预24h后,检测细胞钙盐沉积和钙含量。4.对VSMC进行不同药物干预,分为以下两组:(1)高磷(2.6mmol/L),高磷+渥曼青霉素(100nmol/L),高磷+STS(2.0mmol/L)三个亚组;(2)高磷(2.6mmol/L),高磷+雷帕霉素(100ng/mL),高磷+STS(2.0mmol/L)三个亚组。干预24-48h后,检测各组Cbfα1和OPN mRNA表达;检测各组p-Akt(ser473)、p-mTOR(ser2448)、Cbfα1和OPN蛋白表达。所有实验重复3次。【结果】1.细胞鉴定:倒置相差显微镜观察,大鼠VSMC呈梭行,典型“峰-谷”样生长;抗α-SMA免疫组织化学显示,VSMC胞浆呈现大量棕色颗粒。2.干预7天后,正常磷组无钙盐沉积,而高磷组钙盐沉积明显;与正常磷组相比,高磷组钙含量增高;与正常磷组相比,高磷组Cbfα1和OPN mRNA表达增高(P<0.05);高磷组p-Akt、p-mTOR、Cbfα1和OPN蛋白表达增高(P<0.05)。3.给予STS干预24h后,与高磷组相比,高磷+STS(0.5mmol/L、1.0mmol/L)组钙盐沉积无明显减轻,高磷+STS(2.0mmol/L)钙盐沉积明显减轻;与高磷组相比,高磷+STS(2.0mmol/L)组钙含量明显减少(P<0.05)。4.干预24-48h后,与高磷组相比,高磷+渥曼青霉素(100nmol/L)组及高磷+STS(2.0mmol/L)组Cbfα1、OPN mRNA和蛋白表达减少(P<0.05);与高磷组相比,高磷+渥曼青霉素(100nmol/L)组p-Akt蛋白表达减少(P<0.05),而高磷+STS(2.0mmol/L)组表达无明显变化(P>0.05)。5.干预24-48h后,与高磷组相比,高磷+雷帕霉素(100ng/mL)组及高磷+STS(2.0mmol/L)组Cbfα1、OPN mRNA和蛋白表达减少(P<0.05);与高磷组相比,高磷+雷帕霉素(100ng/mL)组p-mTOR蛋白表达减少(P<0.05),而高磷+STS(2.0mmol/L)组表达无明显变化(P>0.05)。【结论】1.高磷体外诱导大鼠VSMC钙化,激活Akt/mTOR信号分子,促进Cbfα1、OPN表达增高。2.Akt/mTOR抑制剂-渥曼青霉素和雷帕霉素通过抑制VSMC Akt/m TOR信号分子,使Cbfα1、OPN表达减少,减轻高磷诱导的VSMC钙化。3.硫代硫酸钠可抑制VSMC Cbfα1、OPN的表达,从而抑制高磷诱导的大鼠VSMC钙化,但对Akt/mTOR信号分子似无明显影响。