缺血性心脏病（Ischemic heart disease,IHD）是一类严重威胁人类尤其是老年人群的生命健康的常见心血管疾病,其发病率与死亡率在全世界范围内都高居前列。血运重建是治疗严重IHD的重要措施,临床上现有的治疗手段主要有冠状动脉旁路移植术（CABG）和经皮腔内冠状动脉成形术（PTCA）,但因上述两种方法对治疗时间窗和适用人群有严格的限制,且对老年患者治疗成功率较低,可能造成的不良结局更多。血管新生治疗是用多种手段刺激缺血区域心肌组织形成新生血管,从而改善缺血区域血供及预后的一种治疗方式。因此找到可以特异性的新靶点就成为了促进衰老机体缺血心肌血管新生的关键。长链非编码RNA（Long non-coding RNA,Lnc RNA）是一类长度大于200bp的非编码RNA,广泛参与各项生理病理过程的调节,构成一个庞大的调控网络,在胚胎发育、衰老、代谢、器官发生、肿瘤发生及发展等多个过程中均有极其重要的调控作用。而Lnc RNA通常主要通过竞争性内源性RNA（competing endogenous RNA,ce RNA）机制（已知mi RNA与靶m RNA结合后可致该m RNA翻译抑制、降解断裂,从而下调靶基因的表达;若某lnc RNA也能与该mi RNA结合,则该lnc RNA可与m RNA竞争同一条mi RNA,导致该mi RNA与m RNA结合减少,从而阻止该mi RNA沉默靶m RNA,间接上调靶基因的表达）来发挥其作用。Lnc RNA H19是一种主要存在于细胞质内,以调节性RNA或核糖调节子的方式发挥作用的基因,位于人类染色体11p15.5。H19有着多样的生物学功能,比如参与了细胞的增殖、分化及代谢等等,其在人体多种组织中高度表达,尤其是心血管系统的内皮细胞中。已有研究发现,小鼠后肢缺血模型可诱导H19上调,H19抑制剂可减缓HUVEC的生长,并诱导其在细胞周期的G1期积累;H19可促进促进胶质瘤相关内皮细胞增殖、迁移与体外成管,增强胶质瘤细胞侵袭与血管新生的能力。许多研究在在治疗性应用方面表明:H19可促进小鼠肌腱的愈合;予纳米囊泡运输H19后,糖尿病大鼠伤口愈合明显加快,上皮再生能力、新生血管的成熟程度以及血供恢复情况较对照组明显改善。但目前未见H19促进缺血心肌血管新生的相关研究。此外,H19还被证实可减轻缺氧诱导的心肌细胞损伤。在本研究中,细胞实验证实了敲低Lnc RNA H19可抑制HUVEC在体外的增殖、迁移与成管能力;过表达Lnc RNA H19可促进HUVEC在体外的增殖、迁移与成管能力,从而促进血管新生。因此我们下一步利用了生物信息学分析工具（Ensembl/mi RBase数据库,RNAhybrid/miranda软件）对Lnc RNA H19的下游mi RNA进行预测,预测出mi R-454-3p可能为H19的下游靶点,而为进一步探究H19促进血管新生的下游分子机制,同时对mi R-454-3p的下游m RNA进行预测,筛选出可能与H19互为ce RNA的基因（共享mi RNA数目大于等于3,超几何检验p＜0.01）wnk1（with no lysine kines1）,且该蛋白已被证实有促血管新生功能。在利用sh RNA对H19的表达进一步调控及mi R-454-3p的mimics和inhibitors后,通过q PCR、Western blot技术证实了Lnc RNA H19、mi R-454-3p及m RNA wnk1三者之间的调控相关性。并通过双荧光素酶实验进一步确认了Lnc RNA H19与mi R-454-3p、wnk1与mi R-454-3p之间的相互结合作用,即H19作为mi R-454-3p的内源性竞争RNA对其功能,包括下游的m RNA wnk1蛋白间接地进行了调控。最终我们建立起了一条Lnc RNAmi RNA-m RNA调控通路,即H19—mi R-454-3p—wnk1。综上所述,本研究得出了以下结论:Lnc RNA H19可竞争性与mi RNA-454-3p结合,通过ce RNA机制促进wnk1的表达,从而为促进血管新生、改善衰老机体缺血心肌微循环的治疗提供了潜在的新靶点。