【摘 要】
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猪圆环病毒2型(Porcine circovirus2,PCV-2)引起的几种疾病对全世界养猪业造成的经济损失不可估量.该文通过建立的PCR方法,对广东省猪圆环病毒2型的流行情况进行了调查,同时
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猪圆环病毒2型(Porcine circovirus2,PCV-2)引起的几种疾病对全世界养猪业造成的经济损失不可估量.该文通过建立的PCR方法,对广东省猪圆环病毒2型的流行情况进行了调查,同时从送检的病料中分离到3株猪圆环病毒2型,并进行了鉴定.最后对广东市场上销售的猪用弱毒疫苗进行了猪圆环病毒2型的检测.1.根据GenBank发表的PCV-2序列,利用软件设计了一对引物,对可疑病料进行PCR扩增.将PCR产物连接到pMD18-T载体,然后转化到大肠杆菌DH5α,挑取白斑接种到LB液体培养基,37℃摇动12h,抽提质粒,并对重组质粒进行PCR鉴定和酶切鉴定.2.从广东省养猪比较密集的地区117个大、小不同类型养猪场采集了1170份病料,利用建立的PCR检测方法,对广东省猪圆环病毒2型的流行情况进行了调查.在117个猪场中,有81个猪场为阳性(69.23%),36个猪场为阴性(30.77%).3.用建立的PCR方法,对两株来源不同的PK15细胞进行了扩增,扩增结果发现,一株细胞污染了PCV-1,称为PCV-1-PK15;另外一种没有检测出PCV两种基因型的任何一种,称为PCVfreePK15.选取3个来自不同地区经PCR检测阳性的病料,经过研磨,无菌检查后,接种于PCVfreePK15细胞,经过葡糖胺特殊处理30min,继续培养72h后,收集细胞反复冻溶3次后经盲传12代次,通过PCR方法和电镜观察方法鉴定,确认病毒分离物为PCV-2.4.PCV-2为什么能在很短的时间广泛流行,现在还没有一个明确的答案.由于PCV-2病毒不引起细胞病变,该实验假设现用的弱毒疫苗在制作过程中是受到了PCV-2的污染,从而引起PCV-2的广泛流行.用建立的套式PCR(nestedPCR),对广东市场上销售的6种猪用弱毒疫苗共30份进行了检测,结果发现所有被检疫苗均为PCV-2阴性,同时证明疫苗是安全的.
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