盐碱地是巨大的潜在资源,绿化盐碱地是扩大耕地面积,进一步发展农业生产和改善生态环境的重要措施。而培育耐盐抗旱作物新品种是利用盐碱地的一条经济而有效的途径。到目前为止,利用常规方法尚未培育出真正的耐盐抗旱品种。随着植物耐盐抗旱分子机制研究的不断深入和转基因技术的不断完善,利用基因工程手段培育高效耐盐抗旱作物新品种有了新的希望。研究表明,对盐胁迫最适应的基因型具有协调离子跨膜吸收与液泡分隔作用,因此分离与离子跨膜转运、离子分隔相关的关键基因并对其表达产物的功能进行分析显得尤为必要。HAL1基因是酿酒酵母中与耐盐相关的基因,其直接的保护性机制是能够调节细胞内离子均衡;该基因能在盐胁迫下表达,产物为定位于细胞质中的32 KD的蛋白,具有调节Na⁺/K⁺比的作用;虽然HAL1本身不是转运蛋白,但它在酵母体内能与ENA1基因协同作用促进Na⁺外排,与其他转运系统协同作用增加K⁺的吸收,使细胞内保持较低的Na⁺/K⁺比,从而减轻了Na⁺对细胞的毒害作用,因而在植物耐盐基因工程育种上具有很大的应用潜力。本研究用农杆菌介导的叶盘法将HAL1基因转入模式植物烟草,探索了农杆菌介导的烟草遗传转化条件及其影响因素,并对转基因烟草的耐盐性进行了评价。主要研究内容及结果如下:实验探讨了根癌农杆菌生长的培养基类型、细菌生长状态、转化溶液种类及浓度、质粒DNA用量、液氮处理时间等因素对感受态细胞制备和转化效率的影响,建立起了一个高效快速的农杆菌冻融法转化体系,并用该体系转化得到含有重组质粒pROKⅡ/HAL1的农杆菌菌株LBA4404和C₅₈C₁。结果表明,以浓度为70mmo/LCaCl₂为转化溶液,以OD600值为0.5-0.6的菌液为受体细胞,用YEB液体培养基制备的感受态细胞转化效果最佳。100ulLBA4404感受态细胞和10ng质粒DNA于0℃共放置30min,液氮速冻5min,37℃热激5min转化率高达1.4×10⁵转化子/ugDNA;100ul C₅₈C₁感受态细胞和20ng质粒DNA共放置10min,液氮速冻1min,37℃热激1min转化率最高,可达1.33×10⁵转化子/ugDNA。研究了秦选1号和秦烟95烟草叶片的耐卡那霉素水平,为转基因株系的选择提供有效依据。卡那霉素浓度梯度筛选试验表明,分别以20mg/L和30mg/L卡那霉素作为秦选1号和秦烟95在农杆菌转化后抗性芽的筛选浓度为宜;以20mg/L卡那霉素作为转化植株生根时的筛选浓度为宜。为了提高烤烟品种秦选1号和秦烟95的耐盐水平,实验采用农杆菌介导的叶圆盘