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目的:探讨N2型肿瘤相关中性粒细胞与肝细胞肝癌的关系以及缺氧微环境在其中的作用。方法:收集郑州大学附属肿瘤医院肝胆胰外科50例肝细胞肝癌(HCC)患者和20例肝血管瘤患者的临床资料及组织标本。1.首先对比外周血中性粒细胞及其与淋巴细胞比值(NLR)在HCC和肝血管瘤患者中的水平,并分析NLR与预后的相关性;2.其次采用免疫组化检测N2型肿瘤相关中性粒细胞(TANs)的表达水平,分析HCC患者癌组织和癌旁组织中N2型TANs与HCC患者预后的相关性;3.采用免疫组化检测缺氧诱导因子(HIF-1α)的表达水平,初步分析HCC患者癌组织和癌旁组织中N2型TANs与HIF-1α的相关性,并采用PCR检测相关mRNA进行验证;4.最后体外培养HCC患者外周血中性粒细胞,观察缺氧环境中N2型TANs的比例变化,体外缺氧环境下共培养HCC患者中性粒细胞与HCCLM3癌细胞,观察癌细胞的存活情况。综合实验结果探讨缺氧微环境下N2型TANs与HCC的相关性。结果:1.HCC患者外周血中的NLR较肝血管瘤患者明显升高(p<0.05);对NLR与HCC患者的PFS和OS进行相关性分析显示,NLR与HCC患者的预后具有明显的相关性(p<0.05);根据ROC曲线和约登指数结果显示,本组HCC患者中NLR=3.67是最优截断值(敏感性66.67%,特异性85.71%,p<0.05),生存分析及COX回归模型显示NLR与HCC的PFS和OS均呈负相关(p<0.05),NLR是HCC患者OS和PFS的危险因素(p<0.05)。2.N2型TANs在HCC癌组织的浸润程度高于癌旁组织和正常肝组织(p<0.05);COX回归模型结果显示N2型TANs的浸润程度与HCC的预后明显负相关(p<0.05);生存分析结果显示,HCC癌组织中N2型TANs浸润程度高的患者OS和PFS明显较差(p<0.05)。3.HIF-1α在HCC癌组织中的表达水平高于癌旁组织和正常组织(p<0.05);对HIF-1α和N2型TANs的表达情况进行相关性分析,HCC癌组织中HIF-1 α和N2型TANs的免疫组化表达水平明显正相关(p<0.05),并且两者对HCC患者的预后具有一定的交互作用(p<0.05);采用RT-PCR对HIF-1α和N2型TANs特异性表达的ARG1的mRNA进行检测验证了两者的表达情况,并且HCC癌组织中的HIF-1α和ARG1的相对表达量也具有明显的相关性(p<0.05)。4.在常氧和缺氧环境中培养HCC患者外周血中性粒细胞,结果发现缺氧干预后CD66b 阳性的N2型TANs的比例增高(p<0.05),缺氧时间越长,N2型TANs的比例越高(p<0.05);缺氧环境下HCC癌细胞与HCC患者外周血中性粒细胞共培养组较单独培养组的HCCLM3细胞存活数量明显增加(p<0.05),并且随缺氧时间的增加,癌细胞存活数量也相应增加(p<0.05),并且共培养组中的CD66b阳性TANs的比例也明显升高(p<0.05)。结论:1.HCC患者外周血NLR与HCC患者的预后明显负相关,并且NLR是HCC预后的危险因素。2.N2型TANs主要浸润于HCC患者的癌组织中,并且HCC患者癌组织中的N2型TANs表浸润程度与HCC患者的预后明显负相关。3.HIF-1α在HCC患者的癌组织中高表达,其表达水平与N2型TANs的表达水平具有相关性,两者的交互作用是HCC患者预后的危险因素。4.缺氧环境下培养HCC患者的外周血中性粒细胞时N2型TANs的比例增高,缺氧微环境下HCCLM3细胞与中性粒细胞共培养时HCCLM3的细胞存活数量增加。